人脂肪间充质干细胞定向肝实质细胞分化的研究

批准号:
31171310
项目类别:
面上项目
资助金额:
60.0 万元
负责人:
张海燕
依托单位:
学科分类:
C0703.细胞增殖及细胞周期
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
董凌月、刘欣、李卫红、路欣、韩珍、张伟涛、滑明溪
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中文摘要
人脂肪间充质干细胞(hAT-MSCs)是近年来备受关注的成体干细胞,因其具有多向分化潜能而有希望成为治疗肝损伤的靶细胞。但目前尚不明确hAT-MSCs向肝实质细胞(HCs)定向分化的机制。阐明这一机制,将为hAT-MSC治疗肝损伤提供一定的实验依据和理论基础。干细胞分化受细胞内转录因子与细胞外信号分子的精确调控。我们前期工作发现,人肝前体细胞向HCs分化的调节呈明显的阶段性,据此我们假设"hAT-MSCs向HCs定向分化需先分化为腹侧前肠特定内胚层前体细胞(EPCs),继而为肝脏前体细胞"。本课题拟通过体外分离培养hAT-MSCs,流式细胞测定细胞表面抗原,采用不同因子组合对hAT-MSCs进行分阶段诱导,RT-PCR,免疫细胞化学等方法鉴定不同分化阶段细胞的特征,明确hAT-MSCs向HCs定向分化的阶段性特点。利用特异性抑制剂、siRNA研究hAT-MSCs向EPCs分化的信号机制。
英文摘要
近年来的研究表明,基于丰富来源、易获得等优点,人脂肪干细胞(hASCs)成为治疗肝脏疾病最具吸引力的成体干细胞。而明确hASCs定向肝实质细胞分化的机制是hASCs用于肝脏疾病治疗的关键。.本项目拟通过体外分离、筛选同质性的hASCs群体、分析其细胞表型、转录因子表达及多向分化潜能等特征;分析其定向肝实质细胞分化的机制;探讨体外定向诱导hASCs获得的肝实质样细胞(HLCs)对于急性肝脏损伤的修复能力。.研究结果如下:1.分离、优化培养基筛选出同质性的hASCs。2.确定同质性hASCs的特征:高表达CD90、CD73和CD105抗原;表达多潜能因子NANOG,OCT4,SOX2和SALL4;具有定向脂肪、骨骼和软骨分化的多向分化潜能特性。3.建立了三阶段、多因子依次定向诱导hASCs向HLCs分化的程序。4.明确了hASC-HLCs的形态结构、特征性蛋白表达等特点,如具有细胞极性,表达ALB、CK8、HNF4α等蛋白,具有白蛋白分泌,糖原贮存,代谢氨,CYP450活性及胆汁分泌等功能特征。5.明确hASCs定向EPCs分化的作用机制。高浓度Activin A通过磷酸化smad-2/3,Wnt3a及GSK3抑制剂可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路,上调内胚层前体细胞中转录因子HHEX,GATA4,FOXA2和SOX17的表达,但二种信号通路间无明显的协同作用。6.确定hASC-HLCs在去细胞人羊膜基质(AHAM)上可组装形成类肝脏组织样三维结构。将该体系移植到CCl4诱发的急性肝脏损伤裸鼠肝脏内,可明显降低宿主肝脏组织的损伤程度,并可与宿主肝脏完全整合,能维持HLCs特征性蛋白人核抗原、ALB、HNF4α表达。移植8周后,移植物区域出现类血管样结构,在宿主尿液中可检测出人肝实质细胞的代谢产物,说明hASC-HLCs具有肝实质细胞的代谢功能。.本研究表明,定向诱导hASCs可获得具有典型形态特征、成熟功能以及体内修复肝脏损伤的HLCs。这一研究为hASCs真正进入临床治疗、进一步探讨hASCs定向分化机制以及研究病毒感染机制、肝脏代谢性疾病、肝脏特异性药物筛选等,提供重要的理论依据和实验基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Transplantation of human adipose stem cell-derived hepatocyte-like cells with restricted localization to liver using acellular amniotic membrane.
使用脱细胞羊膜移植限制性定位于肝脏的人脂肪干细胞衍生的肝细胞样细胞
DOI:10.1186/s13287-015-0208-9
发表时间:2015-11-05
期刊:Stem cell research & therapy
影响因子:7.5
作者:Yuan J;Li W;Huang J;Guo X;Li X;Lu X;Huang X;Zhang H
通讯作者:Zhang H
Molecular mechanisms regulating the establishment of hepatocyte polarity during human hepatic progenitor cell differentiation into a functional hepatocyte-like phenotype
在人肝祖细胞分化为功能性肝细胞样表型过程中调节肝细胞极性建立的分子机制。
DOI:10.1242/jcs.110551
发表时间:2012-12-01
期刊:JOURNAL OF CELL SCIENCE
影响因子:4
作者:Hua, Mingxi;Zhang, Weitao;Zhang, Haiyan
通讯作者:Zhang, Haiyan
Direct Differentiation of Homogeneous Human Adipose Stem Cells Into Functional Hepatocytes by Mimicking Liver Embryogenesis
通过模仿肝胚胎发生将同质人脂肪干细胞直接分化为功能性肝细胞
DOI:10.1002/jcp.24501
发表时间:2014-06-01
期刊:JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
影响因子:5.6
作者:Li, Xueyang;Yuan, Jie;Zhang, Haiyan
通讯作者:Zhang, Haiyan
DOI:--
发表时间:2015
期刊:中华肝脏病杂志
影响因子:--
作者:李卫红;滑明溪;张海燕
通讯作者:张海燕
整合素α5β1-Src信号轴调节肝实质细胞药物代谢功能成熟的机制研究
- 批准号:81770616
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:56.0万元
- 批准年份:2017
- 负责人:张海燕
- 依托单位:
脑电非线性动力学特征指标自动定量方法在阿尔茨海默病早期诊断中的应用研究
- 批准号:11302139
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:29.0万元
- 批准年份:2013
- 负责人:张海燕
- 依托单位:
人胚肝前体细胞分化过程中Claudins蛋白表达与肝细胞极性建立的研究
- 批准号:30971472
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:29.0万元
- 批准年份:2009
- 负责人:张海燕
- 依托单位:
端粒酶永生化人胚胎肝脏前体细胞的研究
- 批准号:30570975
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:8.0万元
- 批准年份:2005
- 负责人:张海燕
- 依托单位:
国内基金
海外基金
