ASE-HSCCC-DPPH联用技术及在海洋天然活性物质筛选中的集成化研究

批准号:
21205138
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
邓建朝
依托单位:
学科分类:
B0407.仪器创制与大科学装置应用
结题年份:
2015
批准年份:
2012
项目状态:
已结题
项目参与者:
陈培基、刁石强、戚勃、夏国斌、陈晓凤、辛少平、侯彩玲
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中文摘要
我国海洋生物资源丰富,海洋生态环境的特殊性,造就了海洋生物能产生与陆生动植物更加独特的次生代谢天然产物,而快速高效的提取、分离和活性鉴定这些次生代谢产物是海洋天然活性物质筛选的瓶颈。本项目拟集成加速溶剂萃取(ASE)、高速逆流色谱(HSCCC)和二苯基三硝基苯肼(DPPH)开发设计ASE-HSCCC-DPPH联用装置,充分发挥ASE快速高效样品提取、HSCCC高效分离、纯化、制备的特点及DPPH作为抗氧化活性筛选通用方法的优势,并将其应用于海洋天然活性物质研究,为海洋天然产物高通量筛选提供理论和实践可行性。这一联用技术的实现对于推动海洋生物活性物质开发,发现海洋天然活性成分具有十分重要的意义。
英文摘要
China's marine resources are rich. Due to the particularity of the marine environment, marine organisms can produce more unique secondary metabolites natural products compared with terrestrial animal and plant. It has become a bottle-neck for screening and isolation of active substances from marine natural products. An on-line method based upon accelerated solvent extraction (ASE), high-speed countercurrent chromatography (HSCCC) coupled with 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl (DPPH) was developed for continuous isolation of active substances from marine natural products. Accelerated solvent extraction (ASE) has several advantages over traditional solvent extraction methods, including shorter extraction time, lower solvent consumption, higher extraction yields, high reproducibility and less extraction discrimination. HSCCC is a simple, fast and non-complex solvent system technique to isolate and purify compounds from natural plant; The DPPH oxidative assay adopted in the paper is used worldwide in the quantification of radical-scavenging capacity. It was strongly believed that the proposed method would be promising for separation, purification and activity identification of useful substances from marine natural products.
高速逆流色谱是一种不用固态支撑体的液液分配色谱,具有制备量大、回收率高、适用范围广、重现性好、费用低、操作简单、高效快速等优点而被广泛用于天然产物的分离纯化中。加速溶剂萃取与微波辅助萃取作为天然产物提取中的两种非常有发展潜力的新型技术,比传统萃取方法耗时短、使用溶剂量低、自动化高的优势,已使其成为较好的样品前处理方法之一,广泛应用于食品,环境,药物等行业。.本研究选用沿海滩涂的海刀豆,由加速溶剂萃取装置提取其中的活性物质,提取条件经过响应面优化为:萃取温度130℃,萃取时间16 min,甲醇浓度为66%,循环次数2次,得到的理论提取率为84.81%,经验证实际提取率为83.43%;所用的HSCCC分离溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2:5:2:5,v/v),分离纯品用峰面积归一法测得纯度为99.48%;产品结构由MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定,结果显示分离纯品分子量为376.05,名字为(2R,3S,4R,5S)-2,3,4-三羟基-6-甲氧基-6-氧代-5-[(3,4,5-三羟基苯甲酰基)氧基]己酸,在海刀豆中含量为3.461 mg/g。经实验验证,海刀豆分离纯品对于•OH、O2-•、DPPH自由基的IC50分别为0.052、0.057、0.010 mg/mL,表现出较强的抗氧化活性,甚至可与抗坏血酸媲美。.羽状蕨藻由微波辅助萃取提取其中的活性物质-蕨藻红素,确定微波提取最佳工艺条件为:提取溶剂90%乙醇,微波温度50℃,微波功率300 W,微波时间15 min,料液比1:40 g/mL,按此工艺条件进行重复性验证试验得到蕨藻红素的平均提取率为92.93%,RSD为0.50%。蕨藻红素的分离纯化所用的HSCCC 溶剂体系为正己烷-甲醇-水(2: 1: 1,v: v: v);分离所得纯品的纯度为99.37%;产品结构由MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定,结果显示分离纯品分子量为398.13,名字为蕨藻红素;将得到的蕨藻红素纯品进行定量分析,最终得出羽状蕨藻中蕨藻红素的含量为0.2317 mg/g。蕨藻红素纯品对于•OH、O2-•、DPPH自由基的IC50分别为10.8、22.6、23.4 mg/mL,抗氧化能力稍低;而MTT试验显示蕨藻红素对于HL60细胞的生长具有明显的抑制作用。因此,蕨藻红素具有发展成为新型抗肿瘤药物的可能。
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DOI:--
发表时间:2014
期刊:南方水产科学
影响因子:--
作者:邓用川;吴燕燕;郝淑贤;戚勃
通讯作者:戚勃
DOI:--
发表时间:2014
期刊:食品工业科技
影响因子:--
作者:李来好;杨贤庆;戚勃;岑剑伟
通讯作者:岑剑伟
DOI:--
发表时间:2013
期刊:食品工业科技
影响因子:--
作者:杨贤庆;戚勃;邓建朝;宋莹
通讯作者:宋莹
DOI:--
发表时间:2014
期刊:食品工业科技
影响因子:--
作者:吴燕燕;郝淑贤;戚勃;林婉玲
通讯作者:林婉玲
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Advanced Materials Research
影响因子:--
作者:戚勃;李来好;邓建朝;胡晓;
通讯作者:
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