FcγR和CD20单核苷酸多态性影响原发免疫性血小板减少症发病及疗效的机制研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81600091
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
17.0万
负责人：
周海
依托单位：
山东大学
学科分类：
H0804.巨核细胞、血小板与相关疾病
结题年份：
2019
批准年份：
2016
项目状态：
已结题
起止时间：
2017-01-01 至2019-12-31

项目参与者：
刘新光；李丽珍；李国盛；李欣；侯宇；王雅雯；刘洋；
关键词：
CD20 Fcγ受体单核苷酸多态性原发免疫性血小板减少症利妥昔单抗

项目摘要

Immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune hemorrhagic disorder. Previous studies have demonstrated that Fc gamma receptor (FcγR) and CD20 single nucleotide polymorphisms (SNP) played an important role in the pathogenesis and therapeutic efficacy of many autoimmune diseases. However, the effect and mechanism of FcγR and CD20 SNP in ITP is unclear. Our previous results have revealed that the frequency of FcγRIIIa SNP in ITP patients was significantly different from that of normal controls, and FcγRIIIa SNP was related to the therapeutic efficacy of dexamethasone in ITP patients. In this project, we speculate that FcγR and CD20 SNP would influence the molecular function of FcγR and CD20, subsequently the function of immune cells, and then play an important role in the pathogenesis and therapeutic efficacy of ITP. To test this hypothesis, we intend to verify the effect and precise mechanism of FcγR and CD20 SNP on the molecular function of FcγR and CD20, the cell function of B cells and monocytes by combining the analysis of clinical characteristics, in vitro cell-culture, drug therapeutics, external intervention experiments and the mechanism exploration research. Our investigation will shed light on the roles of SNP in ITP and provide a novel target for the management of ITP.

原发免疫性血小板减少症（ITP）是一种自身免疫性出血性疾病。研究证实FcγR和CD20单核苷酸多态性（SNP）在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用，并影响疾病的疗效。但FcγR和CD20 SNP在ITP中的作用和机制尚不清楚。课题组前期研究发现FcγRIIIa SNP在ITP和正常对照间存在显著差异，并影响地塞米松的疗效。我们提出“FcγR和CD20 SNP通过影响FcγR和CD20分子的生物学功能、进而参与调控免疫细胞的功能，影响ITP发病和疗效”这一假说。本课题拟以SNP为切入点，通过临床指标检测和体外实验相结合，从药物治疗、体外干预和机制探讨等不同层面，研究FcγR和CD20 SNP影响ITP患者FcγR和CD20分子的生物学功能，进而调控B细胞和单核细胞等免疫细胞功能的作用，阐明FcγR和CD20 SNP影响ITP发病和疗效的机制，为ITP的个体化诊治提供新的思路。

结项摘要

免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia，ITP）是一种以血小板减少伴或不伴皮肤黏膜出血为特点的获得性自身免疫性出血性疾病，占所有出血性疾病的1/3。研究证实FcγR和CD20单核苷酸多态性（SNP）在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用，并影响疾病的疗效。但FcγR和CD20 SNP在ITP中的作用和机制尚不清楚。已有研究提示我们，FcγR SNP与ITP发病及疗效相关，但研究结果不一，结论有待商榷；此外，课题组前期进行的临床研究发现，靶向清除B细胞的利妥昔单抗治疗ITP患者的总有效率70%左右，仍有约30%的患者对利妥昔单抗无反应。因此FcγR及CD20 SNP在ITP中的作用并探明其机制对于ITP的诊治具有重要意义，亟需进一步深入研究。本课题严格筛选42例ITP患者对比42例相同性别正常对照，提取患者DNA进行全外显子高通量测序，质检后分析SNP筛选结果显示FcγR中位于1号染色体1q23.3的FcγRIIb，FcγRIIIb，以及位于19号染色体19q13.33的FcγRT的突变频率显著高于正常对照并且在四个权威基因组数据库中的突变频率不超过1%，DNA突变影响基因转录，进而导致转录本的表达量降低，这也印证了课题组前期研究，成人ITP患者外周血单个核细胞FcγRIIb表达降低，本课题首次针对ITP患者的遗传物质DNA进行全外显子测序，检测到与ITP相关又存在争议的相关分子进行上游追根溯源，发现FcγR相关基因中的三个基因存在SNP，而将筛选出所有差异SNP进行富集分析，通路富集分析显示ATP结合盒式转运蛋白、细胞外基质受体相互作用、局部粘附、致心律失常性右室心肌病及血小板激活通路在本研究中ITP患者与正常对照组之间有显著差异（P.adjust<0.05）,本课题还进行了2例慢性ITP患者及2例正常对照的全转录组分析，以2倍fold change标准筛选差异基因，其中FcγRIIb的表达ITP患者显著低于正常对照。综上，本课题经全外显子及RNA-seq以及流式细胞学检测结果均表明FcγRIIb基因及表达ITP患者均异于正常对照，且表达降低，但CD20 SNP未见差异。此外，除目的研究基因，本研究还发现许多其他差异SNP及差异表达基因，这为ITP的个体化精准诊断与治疗提供了基础与借鉴。