新疆南疆绵羊戊型肝炎病毒感染性克隆的构建与表达研究

本研究以新疆南疆地区绵羊作为主要检测对象，分别使用北京万泰生物药业有限公司生产的戊型肝炎抗原试剂盒和动物用戊型肝炎抗体试剂盒，采用酶联免疫吸附试验法（ELISA），检测采自新疆南疆阿克苏、库尔勒、喀什以及和田地区的绵羊血清2700份，采用逆转录套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法检测绵羊粪便2400份、胆汁400份、肝脏300份，并对戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV) RNA阳性的PCR产物进行克隆测序及遗传演化分析。同时，采用北京万泰生物药业有限公司生产的戊型肝炎抗原试剂盒、动物用戊型肝炎抗体试剂盒和人用戊型肝炎抗体试剂盒，检测阿克苏、库尔勒、喀什以及和田地区的猪血清1660份（3月龄以上猪血清1000份，3月龄以下猪血清660份）、牛血清1110份、天山马鹿血清410份、鸡血清1800份、犬血清160份、普通人群血清299份、职业人群血清1421份（其中，屠宰工人血清65份、家畜及肉品销售人员血清126份、餐饮服务人员血清650份、超市服务人员血清580份）。结果表明，新疆南疆地区绵羊HEV感染率达到30%（810/2700），感染率相对较高，绵羊血清中没有检测到HEV抗原存在，粪便和胆汁中也没有检测到HEV RNA，肝脏样品中检测到4株HEV毒株，系统进化分析表明，4株HEV毒株与基因Ⅳ型HEV的同源性最高，属于4d亚型，分离毒株不能在A549和HepG2等细胞上有效培养；猪、牛、天山马鹿、鸡、犬、普通人群以及职业人群的HEV抗体阳性率依次为53.25%（884/1660）、7.03%（78/1110）、32.4%（133/410）、1.56%（28/1800）、13.13%（21/160）、9.03%（27/299）、29.06%（413/1421），检出HEV Ag阳性的猪血清样品26份。本研究从基因水平佐证绵羊是感染HEV的又一宿主，绵羊HEV具有感染人的可能性，并进一步相对系统地摸清了戊型肝炎在新疆南疆地区动物和人群中的分布情况，为人畜共患戊型肝炎的防控起到预警作用。