间质干细胞外泌体源miR-615-3p抑制上皮细胞炎症改善哮喘的作用及机制研究
批准号:
81901606
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
19.0 万元
负责人:
贾浩源
依托单位:
学科分类:
H1104.炎症、感染与免疫
结题年份:
2022
批准年份:
2019
项目状态:
已结题
项目参与者:
--
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中文摘要
过敏性哮喘是一种常见的慢性气道炎症性疾病,目前仍缺乏有效的治疗方法。我们预实验结果发现人脐带间质干细胞来源的外泌体(hucMSC-ex)能够改善尘螨诱导的小鼠哮喘,体外能够降低支气管上皮细胞炎症因子的分泌。但是hucMSC-ex中发挥改善作用的关键分子不是很清楚。我们通过small RNA测序筛选出hucMSC-ex中携带的miR-615-3p对哮喘有改善作用,但具体机制有待阐明。因此,本研究将采用miRNA载体构建、荧光素酶活性等分子技术,对靶基因进行筛选、验证及干预,寻找miR-615-3p调控的支气管上皮细胞炎症反应相关靶基因及信号传导通路,阐明hucMSC-ex改善哮喘的作用机制。本研究将为hucMSC-ex治疗哮喘提供新的思路和实验依据,具有十分重要的价值和临床应用前景。
英文摘要
Allergic asthma is a common chronic airway inflammatory disease and there is still no effective treatment. We have found that human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes (hucMSC-ex) can significantly improve asthma induced by house dust mites in mice and decrease the secretion of inflammatory cytokines in bronchial epithelial cells in vitro. But the key molecules in hucMSC-ex are not clear. We screened the miR-615-3p in hucMSC-ex by small RNA sequencing, which had an improvement effect on asthma, but the specific mechanism remains to be clarified. Therefore, this study will use miRNA vector construction,luciferase activity and other cellular and molecular biology techniques to screen, verify and intervene target genes, investigate the target genes and signal transduction pathways related to the inflammatory response of bronchial epithelial cells regulated by miR-615-3p. We expect to elucidate the mechanism of hucMSC-ex in improving asthma. This study will provide a new idea and experimental basis for hucMSC-ex in the treatment of asthma, which has a very important value and clinical application prospect.
背景:哮喘是由多种细胞和生物活性介质参与的非特异性炎症反应性疾病,尽管药物能够控制哮喘症状,但是临床目前仍无法治愈。人脐带间质干细胞来源的外泌体(hucMSC-EX)在组织损伤修复和免疫调节中发挥重要作用。但其在哮喘中的作用并不是很清楚。.主要研究内容:通过构建屋尘螨(HDM)诱导的体内外哮喘模型,观察hucMSC-EX对哮喘小鼠及人支气管上皮细胞16HBE炎症反应的作用。阐明hucMSC-EX中改善炎症的关键分子以及调节机制。.重要结果和关键数据及其科学意义:在体外与HDM组相比,hucMSC-EX组肺组织气道壁无明显增厚,管腔相对规则,气道周围水肿及炎症细胞浸润、黏液蛋白沉积明显减少;hucMSC-EX组与HDM组相比,肺组织和血清中IL-4、5、6、8、13表达下降;HDM组sIgE含量明显升高,相反hucMSC-EX组含量下降。此外,hucMSC-EX 组 BALF 中白细胞总数以及嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例降低。.在体外与HDM组相比,hucMSC-EX组16HBE细胞凋亡数量减少;qRT-PCR和luminex液相芯片检测发现hucMSC-EX降低细胞炎症因子IL-4、5、6、8、33的合成和分泌降低;WB和IF检测发现与HDM组相比,hucMSC-EX减少IL6、IL6R蛋白的表达。.Small RNA测序发现与HFL-EX相比,hucMSC-EX高表达has-miR-615-3p。hucMSC转染过表达和干扰has-miR-615-3p慢病毒,获得高表达的OE has-miR-615-3p-EX和低表达的SH has-miR-615-3p-EX。与OE control组相比,OE has-miR-615-3p-EX减轻肺组织炎症细胞浸润,气道周围水肿、黏液沉积更明显,相反SH has-miR-615-3p-EX能够加重肺组织炎症症状。双荧光素酶报告基因检测发现has-miR-615-3p靶向负调节IL6ST。进一步发现过表达has-miR-615-3p 降低293T细胞和16HBE中IL6ST、p-JAK1和p-STAT3蛋白的表达;相反,低表达has-miR-615-3p增加其表达。因此本研究发现hucMSC-EX转运has-miR-615-3p靶向IL6ST调节JAK/STAT3信号通路改善炎症。本研究为哮喘临床治疗提供了新的思路和依据。
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DOI:10.1177/0300060520903220
发表时间:2020
期刊:Journal of International Medical Research
影响因子:--
作者:Feng Huang;Haoyuan Jia;Yingfen Zou;Yongliang Yao;Zhiyong Deng
通讯作者:Zhiyong Deng
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