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苏云金杆菌Cry毒素抗假眼小绿叶蝉的定向筛选与改造
结题报告
批准号:
31071745
项目类别:
面上项目
资助金额:
35.0 万元
负责人:
关雄
依托单位:
学科分类:
C1406.生物防治
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
黄天培、张灵玲、邵恩斯、林宏立、梁雪、庄浩瀚
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中文摘要
利用短肽文库展示、融合蛋白表达和荧光差异显示等多种分子生物学技术寻找可以和茶假眼小绿叶蝉中肠结合的短肽;并应用定点突变等分子操作方法将筛选到的短肽用于改造Cry1A和Cry3A毒素,期望改造后的毒素具有能够和茶假眼小绿叶蝉中肠结合的功能。此后,运用SDS-PAGE、免疫印迹等生物化学手段验证改造后的Cry1A和Cry3A蛋白和叶蝉中肠细胞膜结合并进行毒理测定。本研究探索将Cry毒素用于防治我国重要的茶叶害虫茶假眼小绿叶蝉的可能性,为扩展Cry毒素蛋白用于防治半翅目和同翅目害虫提供理论和应用基础,并为用分子工程手段发展新型害虫毒素提供新的思路和方向。
英文摘要
本研究筛选出多条能与假眼小绿叶蝉中肠刷状缘膜囊泡(brash border membrane vesicle, BBMV)结合的短肽。同时,还以同为半翅目刺吸式口器害虫的褐飞虱作为对象,分别筛选出能够与其中肠内膜及BBMV结合的短肽。利用获得的短肽对苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)Cry1Ab毒素domainⅡ中受体结合功能域进行逐一替换构建了6株重构Cry毒素:Cry1Ab-1S、Cry1Ab-2S、Cry1Ab-3S、Cry1Ab-1Z、Cry1Ab-2Z及Cry1Ab-3Z。经蛋白稳定性测定、结合活性测定及生物测定,发现Cry1Ab-2S对褐飞虱毒性作用较之未改造Cry1Ab毒素提高了13倍,致死中浓度(LC50)达17.47 μg/mL。通过激光共聚焦显微镜及透射电镜观察证明Cry1Ab-2S能够与褐飞虱中肠内膜上皮细胞中某个受体结合并对肠道上皮细胞产生消解。此外,本研究还对Cry1Ab毒素在褐飞虱体内的活化情况进行分析,并对Cry1Ab毒素在半翅目刺吸式口器昆虫中肠内的作用机制进行了讨论。
期刊论文列表
专著列表
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会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2011
期刊:莆田学院学报
影响因子:--
作者:黄响珠;林秋秋;吴远杰;张灵玲;关雄
通讯作者:关雄
DOI:--
发表时间:2011
期刊:激光生物学报
影响因子:--
作者:苏新华;潘洁茹;蒋捷;黄天培
通讯作者:黄天培
DOI:10.1111/j.1948-7134.2011.00189.x
发表时间:2011-12
期刊:
影响因子:--
作者:Lingling Zhang;Songqing Wu;Yan Peng;Mingwei Li;Linying Sun;En-jiong Huang;X. Guan;I. Gelbič
通讯作者:Lingling Zhang;Songqing Wu;Yan Peng;Mingwei Li;Linying Sun;En-jiong Huang;X. Guan;I. Gelbič
Effect of Chemical Additives on Bacillus thuringiensis (Bacillales: Bacillaceae) Against Plutella xylostella (Lepidoptera: Pyralidae)
化学添加剂对苏云金芽孢杆菌(芽孢杆菌目:芽孢杆菌科)对抗小菜蛾(鳞翅目:螟虫科)的影响
DOI:10.1603/ec12288
发表时间:2013-06
期刊:Journal of Economic Entomology
影响因子:2.2
作者:Zhang, L.;Qiu, S.;Huang, T.;Huang, Z.;Xu, L.;Wu, C.;Gelbic, I.;Guan, X.
通讯作者:Guan, X.
DOI:--
发表时间:2013
期刊:农业生物技术学报
影响因子:--
作者:邵恩斯;林莉;关雄
通讯作者:关雄
苏云金芽孢杆菌几丁质水解酶多酶体系及蛋白功能研究
  • 批准号:
    30571257
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    21.0万元
  • 批准年份:
    2005
  • 负责人:
    关雄
  • 依托单位:
国内基金
海外基金