单核细胞增生李斯特菌遗传多样性及危害机制研究

本项目围绕单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）在华南四省食品中的分布、遗传多样性及其危害形成的分子机理展开研究，共采集华南四省790份食品样品，其中即食食品LM污染率为6.33%(10/158)，MPN值均小于10 MPN/g，分离株血清组II.1占据优势，发现1株多药耐药性菌株；65份奶制品没有检出。生鲜食品LM污染率为21.7%（123/567），86%阳性样品MPN值小于100 MPN/g；分离株血清组I.1占42.4%，II.2占26.0%，I.2、II.1和III分别占18.1%、7.3%和6.2%；毒力基因携带率为84.7%，59.9%对15种抗生素敏感，28.2%具有多重耐药性；利用ERIC-PCR和RAPD分析LM遗传多样性，分辨力分别为0.960和0.972。共分离得到462株LM，初步构建了食源性LM菌种资源库，完成了优势株798-1WT菌株全基因组测序。首次对金针菇生产企业进行LM污染溯源分析发现LM污染为血清组I.1和II.2，经表型和遗传型分析，发现搔菌机械刀头可能是LM污染的主要源头。蛋白质组学技术研究表明LM在低酸、低温和高盐条件下下调表达CodY增强了能量相关的碳水化合物代谢，推测三重胁迫条件下可能激活了脂肪酸合成途径。利用Tn917转座子插入LM4b G基因组得到了菌膜形成能力增加的突变株LM-49，突变的基因编码ABC转运子lm.G_1771。生物信息学分析证实Lm.G_1771在革兰氏阳性细菌中高度保守。lm.G_1771基因缺失株⊿1771与LM-49具有相同的菌膜形成能力，证实lm.G_1771负调控LM菌膜的形成。群体感应agrD和luxS基因缺失株在生长、形态和鞭毛形成方面未发生变化，但agrD基因可能在生物膜形成中起着正调控作用，luxS基因则扮演负调控的角色，而ΔagrDΔluxS突变株的生物膜形成能力显著减弱。单基因缺失株耐氧胁迫能力均下降，ΔagrDΔluxS缺失株抗氧胁迫能力未发生变化。本项目研究结果为食品生产防控LM提供了数据和理论基础，对保障食品微生物安全具有重要意义。