穿心莲内酯对白念珠菌耐药生物被膜的抑制作用及机制研究

本项目已完成。.重要结果：.（1）穿心莲内酯（AG）对白念珠菌氟康唑耐药株2h的早期黏附的干预作用较明显；qRT-PCR结果表明AG可显著抑制ALS3，EAP1的表达，但对ALS1的表达具有促进作用。结论：AG可能通过抑制白念珠菌氟康唑耐药株某些黏附基因的表达而抑制其早期黏附，而黏附是形成生物被膜的第一步也是非常关键的一步。.（2）AG能影响白假丝酵母菌菌落的形态，倒置显微镜观察表明AG能够抑制白假丝酵母菌菌丝及芽管的形成，qRT-PCR检测显示AG能使SUN41和CSH1基因表达下调和使CaPDE2上调。表明穿心莲内酯可能通过影响SUN41、CSH1与CaPDE2基因的表达而抑制白假丝酵母菌菌丝的形成，而菌丝是构成白念生物被膜的主要结构组分。.（3）AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性；扫描电镜显示AG诱导生物膜分散的细胞均为酵母相；qRT-PCR结果表明AG使HSP90表达上调，使UME6和PES1表达下调。表明AG能一定程度的诱导白念珠菌生物膜分散，而分散是生物被膜引起感染播散的关键因素。.（4）1000，100µM的穿心莲内酯能诱导白念珠菌生物膜细胞核固缩、浓染致密，1000，100，10µM的穿心莲内酯能降低白念珠菌生物膜线粒体膜电位，提高细胞内ROS水平。表明一定浓度的穿心莲内酯可诱导白念珠菌生物膜分散细胞凋亡，而凋亡也是目前发现抗真菌的主要机制之一。.（5）白念珠菌生长2h时法尼醇和酪醇分泌量较少，AG作用后变化不明显；12h后分泌量最高，24h回落。不同浓度AG干预后，法尼醇含量降低，酪醇升高，呈现剂量依赖性。qRT-PCR结果显示， AG在2、12、24h时分别使CHK1与PBS2下调；HOG1变化不明显。.（6）穿心莲内酯衍生物炎琥宁（YHN）干预后的导管片上CFU明显少于空白组；XTT代谢活性也显示YHN组低于空白组，且呈剂量依赖性；扫描电镜照片显示YHN能显著减少白念珠菌对大鼠体内导管的黏附；qRT-PCR结果显示，YHN可下调ALS1、ALS3、HWP1、EAP1和MP65的表达量。表明YHN能抑制大鼠体内白念珠菌生物膜。.（7）AG联合氟康唑（FLC）抗耐药白念珠菌呈相加作用；AG对CDR外排功能无影响；AG可抑制MDR外排功能；AG联合FLC能显著提高耐药白念珠菌细胞ROS水平；AG与FLC联合作用于耐药白念