恶性黑素瘤细胞三维侵袭性生长模型的建立与评价

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81172211
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    14.0万
  • 负责人：
    鲁元刚
  • 依托单位：
    中国人民解放军第三军医大学
  • 学科分类：
    H1826.肿瘤学研究新技术与新方法
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2012-12-31

项目摘要

恶性肿瘤的侵袭特性是决定肿瘤转移、临床预后的关键。肿瘤三维培养模型将为肿瘤侵袭性研究提供新的技术手段。我们拟利用前期研制复方壳多糖组织工程皮肤所建立的良好技术平台，建立恶性黑素瘤（MM）的三维侵袭性生长模型。采用组织学、电镜、激光共聚焦等方法，研究不同时相点加入MM细胞、或与角质形成细胞和成纤维细胞不同浓度配比、不同葡萄糖浓度、静态与灌注等培养条件下，肿瘤团块形成和基底膜结构破坏的差异；同时采用ELISA、免疫印迹等方法检测侵袭过程中基质金属蛋白酶（MMP-2与MMP-9）和胶原酶的分泌水平；利用绿色荧光蛋白标记瘤细胞，动态观察MM三维培养模型中成瘤及侵袭过程；通过miRNA芯片和RT-PCR检测并验证MM侵袭性生长相关miRNAs，进而构建反义miRNA表达载体，观察转染瘤细胞的侵袭特性的变化，为今后MM的生物学特性和治疗药物研究及其它肿瘤三维培养模型的建立提供可靠的实验依据。

结项摘要

恶性肿瘤的侵袭特性是决定肿瘤转移、临床预后的关键。肿瘤三维培养模型将为肿瘤侵袭性研究提供新的技术手段。恶性黑素瘤是临床上侵袭性极高、转移发生早的恶性肿瘤。我们利用前期研制复方壳多糖组织工程皮肤所建立的良好技术平台，调整A375细胞接种方式和培养方法，在真皮基质内加入成纤维细胞时，在基质表面接种A375细胞和角质形成细胞，行气-液面交界培养2周后，可观察到黑素瘤A375细胞在真皮层形成细胞团块，随培养时间延长向下生长越深,成功建立皮肤恶性黑素瘤三维培养模型。免疫组化染色显示，真皮层的黑素瘤细胞E-Cadherin表达缺失，而PCNA、MMP-9的阳性表达，且表达强度与肿瘤侵袭深度及培养时间正相关。通过电镜可以观察到真皮中的黑素瘤细胞生长良好，瘤细胞间通过桥粒连接成细胞团，且与周围成纤维细胞间也存在连接。本研究建立的恶性黑素瘤体外三维培养模型，为今后深入研究MM的生物学特性和治疗药物研究及其它肿瘤三维培养模型的建立提供可靠的实验依据。

项目成果

期刊论文数量（1）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
肉桂醛对恶性黑素瘤A375细胞增殖和分泌VEGF的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    第三军医大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    鲁元刚
  • 通讯作者：
    鲁元刚

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  • 通讯作者：
    鲁元刚
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  • 发表时间：
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
    WU Jin-jin
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  • DOI：
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  • 发表时间：
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    --
  • 作者：
    雷霞;鲁元刚;刘渤;伍津津;杨亚东
  • 通讯作者：
    杨亚东

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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