油菜激素反应突变体的筛选与分子遗传学研究

以课题组已经构建的油菜激活标签突变体库为材料，筛选植物激素GA、ABA及GA生物合成抑制剂敏感或不敏感突变体，采用质粒拯救或Tail PCR克隆激素反应相关基因，随后构建其过量表达转基因株系，通过表型检测确定能重现激活标签突变体表型的基因。在此基础上，采用RNAi技术构建该类基因的功能缺失突变体。通过分析不同激素、不同光照条件处理时，转基因油菜种子萌发或幼苗表型的变化，以及生长发育过程中的生理生化指标，明确该类基因在油菜激素信号传导和油菜生长发育中的功能。为了进一步明确油菜的激素代谢调控机制以及激素调控油菜生长发育和产量的分子基础，我们将通过GFP融合蛋白表达观察和GUS显色分析，确认该类基因的亚细胞定位及器官、组织表达特异性。同时，制备该类基因的抗体，采用RT-PCR、Q-PCR及Western blot分析不同激素、不同光照条件处理时以及油菜不同发育时期其mRNA水平和蛋白丰度的变化。