自噬逃脱线粒体DNA介导TLRs-MyD88-NFκB信号通路在呼吸机相关性肺损伤中的作用机制

批准号:
81460016
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
45.0 万元
负责人:
潘灵辉
依托单位:
学科分类:
H0109.急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征
结题年份:
2018
批准年份:
2014
项目状态:
已结题
项目参与者:
林飞、钱卫、葛万运、杜学柯、黄宇、裴圣林、黄翠源、贺盛、张维康
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
微信扫码咨询
中文摘要
前期研究表明:在VILI中TLR9、MyD88、NF-κB及炎性因子表达上调,但TLRs在VILI中的作用机制尚未清楚。有报道认为细胞受刺激后,线粒体DNA活化TLR9,募集趋化嗜中性粒细胞脱颗粒,造成器官损伤。我们假设:压力牵张导致细胞线粒体损伤,逃逸线粒体DNA介导信号传导,诱发炎症反应,导致VILI。为了阐明假设,建立VILI动物模型,研究mtDNA及DNaseⅡ的表达,阐明细胞自噬与VILI的作用机制;提取肺巨噬细胞、中性粒细胞、肺泡上皮细胞,检测mtDNA的表达,分析mtDNA的细胞来源;应用TLR9的激动剂、抑制剂及应用慢病毒转染、自噬诱导剂和自噬抑制剂分别作用于动物体内及体外肺巨噬细胞,研究mtDNA与炎性因子释放及TLRs表达,探讨mtDNA与TLRs/MyD88/NF-κB信号通路介导炎症反应的相关性,阐明VILI发生的分子机制,为有效防治VILI提供新的理论依据。
英文摘要
It is demonstrated in our previous studies that TLR9, MyD88, NF-κB, IL-1β, IL-6 up-regulate significantly in the experimental VILI, but the roles of TLR ligands in the VILI have not yet been fully elucidated. Several studies have convincingly shown that neutrophil degranulation accumulation recruit by activated TLR9 via mitochondrial DNA after cell damage result in inflammatory response, contribute to organ damage. We sought to propose the hypothesis that, pressure tension will cause mitochondria damage and the escape of mitochondrial DNA thus mediate signal transduction which leads to inflammatory response, and eventually VILI. In order to elucidate the assumption, lung tissue and cells of mtDNA and DNase Ⅱ expressions were detected in models of VILI to clarify the mechanism of cell autophagy in VILI. And to investigate the source of mtDNA in the VILI, pulmonary macrophages, neutrophils, alveolar epithelial cells were extracted and detection of their mtDNA were required. Pulmonary macrophage in vivo and vitro were stimulated with agonists and inhibitor of TLR9, autophagy inducers and autophagy inhibitors respectively to detect the expressions of mtDNA, inflammatory cytokines and TLRs , and to investigate the relation between mtDNA and TLRs/MyD88/NF-κB signaling pathway which mediated inflammatory response. This research will further clarify the molecular mechanism of VILI, which would provide new clues of treatment for VILI.
目的:探讨自噬逃脱线粒体DNA介导的TLR9/MyD88/NF-κB信号通路在VILI中的作用机制。.方法:对不同潮气量和通气时间的机械通气大鼠模型行WB检测自噬蛋白表达,透射电镜观察自噬小体数量,并检测ATP、ROS和ΔΨm变化。建立大鼠VILI模型后收集血清、BALF和肺组织。测定肺组织湿/干比(W/D),观察肺组织病理学和超微结构改变,ELISA测定血清和BALF炎症因子浓度,RT-qPCR和WB检测LC3B、COX IV和NF-κB mRNA及蛋白表达。采用AmA和CsA分别增强和抑制线粒体自噬,比较各组间肺水肿、肺损伤及炎症反应,检测DNase-II、mtDNA和LC3B表达,免疫荧光分析mtDNA来源。采用ODN2088和CQ分别抑制TLR9和mtDNA,比较各组间肺水肿、肺损伤及炎症反应,并检测COX IV、TLR9、MyD88和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。建立A549细胞牵张损伤模型,干扰或过表达PINK1、ODN2088和CQ分别抑制TLR9和mtDNA,探讨mtDNA介导TLR9/MyD88/NF-κB信号通路在细胞牵拉损伤中的作用,自噬慢病毒载体Stub-RFP-Sens-GFP-LC3B转染A549细胞后利用荧光显微镜下对比观察自噬流变化。.结果:.1. VT超过30 mL/kg、通气大于2.0 h可引起线粒体自噬,并ATP合成障碍、ROS积累和ΔΨm下降。大VT机械通气可明显引起急性肺组织炎症性损伤,且肺组织水肿、损伤和炎症反应程度与自噬程度与呈正相关。增强自噬时,血清DNase-II表达下调,胞内mtDNA 增加,肺组织炎症反应加重。.2. CON组和NTV组大鼠肺组织结构基本正常,HTV组肺组织见明显炎症性改变。与NTV组和CON组比较,HTV组大鼠肺W/D比、BALF总蛋白、血清炎性因子含量均明显升高, COX-4、TLR9、MyD88和NF-κB p65蛋白表达上调。ODN2088明显降低肺组织TLR9、MyD88、NF-κB p65表达;CQ明显降低肺组织COX-4、TLR9、MyD88、NF-κB p65表达;均能减轻大VT通气所致的炎性反应。.3.与CON组和5%CS组相比,20%CS组炎性因子含量显著增加。与CON组、20%CS组、Vector组和PINK1 siRNA组相比,PINK1 cDNA组Parkin、
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2017
期刊:中华危重病急救医学
影响因子:--
作者:荆忍;潘灵辉
通讯作者:潘灵辉
Glycyrrhizin Ameliorate Ischemia Reperfusion Lung Injury through Downregulate TLR2 Signaling Cascade in Alveolar Macrophages.
甘草酸通过下调肺泡巨噬细胞中的 TLR2 信号级联减轻缺血再灌注肺损伤
DOI:10.3389/fphar.2017.00389
发表时间:2017-01-01
期刊:Frontiers in pharmacology
影响因子:5.6
作者:Fei, Lin;Jifeng, Feng;Linghui, Pan
通讯作者:Linghui, Pan
DOI:--
发表时间:--
期刊:中华危重病急救医学
影响因子:--
作者:胡召琨;荆忍;戴惠军;张随随;潘灵辉
通讯作者:潘灵辉
High Tidal Volume Induces Mitochondria Damage and Releases Mitochondrial DNA to Aggravate the Ventilator-Induced Lung Injury.
高潮气量诱发线粒体损伤并释放线粒体DNA,加重呼吸机所致肺损伤
DOI:10.3389/fimmu.2018.01477
发表时间:2018
期刊:Frontiers in immunology
影响因子:7.3
作者:Lin JY;Jing R;Lin F;Ge WY;Dai HJ;Pan L
通讯作者:Pan L
DOI:DOI: 10.3389/fphar.2017.00389
发表时间:2017
期刊:Front Pharmacol
影响因子:--
作者:Lin Fei;Feng Jifeng;Wang Tiantian;He Yi;Pan Linghui
通讯作者:Pan Linghui
纳米颗粒微囊泡包裹TGF-β激活调节性B淋巴细胞在VILI中的作用机制
- 批准号:81970078
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:潘灵辉
- 依托单位:
RhoA/ROCK信号通路调控肺泡巨噬细胞微囊泡形成介导VILI的分子机制研究
- 批准号:81670079
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55.0万元
- 批准年份:2016
- 负责人:潘灵辉
- 依托单位:
Toll样受体在呼吸机相关性肺损伤发病机制中的作用
- 批准号:81060008
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:25.0万元
- 批准年份:2010
- 负责人:潘灵辉
- 依托单位:
国内基金
海外基金
