皮肤刺激性评价特异性生物标记的筛选及器官型皮肤替代模型的建立

替代方法研究的滞后、成熟替代产品的缺失以及相关基础研究的不足已经成为我国药物和化妆品毒性评价的薄弱环节。本课题组前期研究已成功将成体表皮干细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、黑色素细胞共培养构建组织工程皮肤，能在体外存活并能修复裸鼠全层皮肤缺损。本研究在此基础上加入朗罕氏细胞，构建新型器官型人工皮肤，并系统地研究该皮肤与正常皮肤在形态、生化及基因表达上的差异性和相似性，重点探讨调控皮肤模型构建的关键点。采用基因芯片和2-DE/MALDI-TOF等高通量生物技术筛选适用于体外评价皮肤刺激性反应的特定基因和蛋白作为侯选标记物。针对侯选标记物制备特异性引物和抗体，采用荧光定量PCR和western-blot 方法进行进一步验证，最终确定特异性的生物标记，并完善器官型人工皮肤替代模型的建立。本研究建立的方法与技术体系将为我国开展替代方法的研究提供重要借鉴，由此衍生的技术产品具有重大有经济价值。