鸡马立克氏病(Marek’s Disease, MD) 是严重危害养鸡业的重要传染病，该病由疱疹病毒科细胞结合性马立克病毒(MDV)引起，是一种高度接触性的恶性T淋巴细胞增生性肿瘤疾病，严重影响家禽健康。本项目利用荧光素酶报告基因实验和Western blotting实验验证miRNA靶基因，针对靶基因设计siRNA，转染马立克氏病肿瘤细胞系MSB1，检测miRNA表达，进一步验证miRNA与靶基因的直接作用，同时观察miRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭的影响，系统的分析miRNA及靶基因在马立克氏病肿瘤转化进程中的作用，解析机体的抗性/易感性机制。本研究共验证了11个miRNA在马立克氏病毒感染的鸡脾脏、肝脏淋巴瘤、未感染对照组脾脏中差异表达，并对5个在MDV感染样本中表达下调的miRNA进行靶基因的预测和验证工作，确定ANP32A、MYBL1是gga-miR-181a的靶基因；NEK6是gga-miR-26a的靶基因；CCNE1、TFDP2是gga-miR-103-3p靶基因；HOXA3和MDFIC 是gga-miR-130a靶基因，BCL11B是gga-miR-219b靶基因。上述miRNAs能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭，体现了miRNA的抑癌作用。本项目对gga-miR-219b在MD样本中的低表达原因进行了解析，Methprimer软件预测发现gga-miR-219b前体序列编码基因上游2Kb范围内存在CpG岛，利用亚硫酸氢盐处理DNA结合PCR克隆测序的方法（BSP）检测发现其上游17个CpG位点的DNA甲基化水平在MDV感染组高于未感染对照组，该区域为转录因子IRF7的结合位点，以此推测编码基因调控区域的DNA高甲基化水平阻碍了IRF的结合，导致了gga-miR-219b在MD肿瘤样本中低表达。 利用RNAi干扰技术对BCL11B进行了knockdown，结果表明在BCL11B基因knockdown的MSB1细胞系中，细胞增殖、迁移、侵袭均受到抑制，细胞凋亡增强，该结果间接表明BCL11B的促癌作用。无论在gga-miR-219b过表达模型中还是在BCL11B knockdown模型中MDV基因组上最重要的致癌基因Meq均受到抑制，该结果提示我们可以通过外源miRNA干扰Meq基因的表达，为马立克氏病的控制提供新思路。