活化蛋白样转录因子AP1对过氧化氢诱导米根霉凋亡的调节机制

侵袭性毛霉病病死率高，临床危害极大，其中米根霉尤为高发。米根霉孢子进入体内，需要面对机体吞噬细胞产生的反应活性氧。研究重要的反应活性氧过氧化氢对米根霉的作用对于疾病的防治十分必要。本课题研究过氧化氢（H2O2）和两性霉素B（AMB）作用下米根霉出现的凋亡现象其凋亡的调控机制。在体外不同浓度的H2O2和AMB诱导后，分别使用Annexin-V/FITC染色和TUNEL染色在荧光显微镜下观察米根霉的凋亡表现；观察基因组DNA琼脂糖凝胶电泳表现；DHR123/PI染色流式细胞计数确定早晚期凋亡细胞的数目比例；米根霉基因组BLAST方法确定其Metacaspase和AP1同源基因Rca1和Rap1，并用real-time PCR方法检测凋亡后转录水平的基因表达情况。结果发现米根霉在H2O2和AMB诱导下均可出现凋亡表现，不同浓度的H2O2和AMB诱导凋亡的能力不同，浓度越高晚期凋亡或坏死细胞所占比例越高。采用Annexin-V/FITC荧光染色、TUNEL染色和DHR123/PI染色流式细胞计数可以清晰辨别凋亡细胞。诱导凋亡后米根霉基因组DNA出现弥散现象，并没有梯状DNA 现象出现。凋亡出现后米根霉Rca1和Rap1基因表达水平无明显变化。本课题得出结论米根霉在H2O2和AMB诱导下存在凋亡现象，可通过荧光显微镜下观察Annexin-V/FITC染色、TUNEL染色和DHR123/PI染色流式细胞计数检测。米根霉凋亡可能存在非AP1/非caspase依赖途径。本研究从细胞凋亡角度入手研究米根霉对抗氧化压力及药物压力下的反应，发现在H2O2和AMB诱导下均可出现凋亡表现，在致病性研究方面是崭新领域，为临床疾病的防治提供新的思路。