本课题首先检测和比较了念珠菌易感小鼠CBA/CaH与耐受小鼠BALB/c中性粒细胞的Rac1的表达量、ROS和DNA释放量，确定了Rac1在NETs形成机制中的地位。然后，进一步研究了白色念珠菌 PAMPs 激活人类中性粒细胞 Rac 信号通路形成 NET，通过人类中性粒细胞分别与两株白色念珠菌SC5314和3683共培养，得出两株念珠菌均能成功诱导出NETs；通过免疫荧光共聚焦显微镜观察，发现两株念珠菌诱导出的NETs存在差异，其中SC5314诱导出的NETs最多，3683较少。通过Western blot和 荧光酶标仪检测到念珠菌与中性粒细胞共培养后，SC5314组 Rac1 和ROS表达水平高于3683组，由此证实了ROS 和Rac 与 NET 的形成密切相关，同时也对两株念珠菌致病力差异做出了解释。.为了进一步研究两株白念刺激中性粒细胞的形成NETs差异原因，检测了选择了白色念珠菌多个PAMPs，最后筛选出两个差异比较明显的抗原ADH 和Enolase，通过免疫荧光、Western blot发现SC5314的表达量较3683/3630均高；进而根据ADH，Enolase基因序列构建载体，原核表达重组蛋白，得到纯化重组ADH和Enolase，并用重组蛋白刺激中性粒细胞，结果显示均可诱导出NTEs，初步检测了其对中性粒细胞ROS的合成量及Rac信号通路的影响，实验正在进行中。同时进行了白色念珠菌对中性粒细胞逃逸机制的研究，通过DNA电泳检测到两株念珠菌与中性粒细胞共培养上清中均有DNase，进一步通过单相酶扩散法对其定量发现SC5314组DNase的表达量较3683组高，提示SC5314对NETs的逃逸作用更强，也进一步解释了SC5314的致病力较3683强；为了证实这一结果，体外克隆表达纯化了重组DNase，其在逃逸过程中的作用实验研究正在进行中。本研究的重要发现是：白色念珠菌PAMPs可激活中性粒细胞Rac信号通路形成NET，而且白色念珠菌可分泌DNase逃逸NETs的捕捉。研究结果已发表SCI论文3篇，待发表一篇。培养研究生5名，其中3名已取得硕士学位，2名在读。项目投入经费65万元，总支出59.2913万元，各项支出基本与预算相符，结余5.7087万元，结余经费将用于后续研究和支付论文撰写、发表等开支。