按计划完成鸭大肠杆菌marA、acrB基因缺失株构建、主要耐药机制相互关系及MDR调控机制研究。用带kan及marA同源臂的线性靶DNA片段（1.6kb），通过Red同源重组和位点特异性重组，成功构建O73 marA单基因缺失株；制备长同源臂（2.5kb），也成功敲除marA 基因。以带有kan及acrB同源臂的靶DNA（1.7 kb），同法构建出acrB单基因缺失株。经P1噬菌体转导，分别获得分离菌marA和acrB缺失株。创新建立的基因缺失株构建方法，为多调节或耐药基因的同时敲除，全面研究MDR调控机制及MDR机制间的相互关系奠定了良好基础。. 比较了标准、诱导或分离菌及相应基因缺失株多个外排、调节基因的mRNA表达水平、Omp表达量及MDR表型。QRT-PCR测定显示，分离菌耐药程度、耐药谱与acrA、acrB的表达密切相关，而与acrE、acrF、mdtA 表达并不密切相关，acrD表达与对氨基糖苷类的耐药程度明显相关。耐药谱广和高水平耐药菌株marA、 soxS表达量高，但robA的表达量低于对照菌。分离菌敲除marA 后，6种外排基因的表达量降低1.8-2.8倍，而敲除acrB ，marA 、SoxS、RobA表达无明显变化，5种外排基因mRNA的表达增加。. Omp测定表明：Omp表达降低或缺失亦在MDR中具有作用，以OmpF、OmpA缺失和OmpC表达量减少为主。敲除marA、acrB，OmpC表达量升高，反向表明Omp表达受marA负性调控。O73敲除marA，庆大霉素、头孢噻呋、氟苯尼考、恩若沙星、多西环素的MIC下降8-16倍；敲除acrB，5药的MIC亦显著下降。O73敲除marA、acrB后, 经5种药物诱导30-40代，均不出现MDR。这从mRNA表达、表型反向证明：acrB在MDR中有重要作用，marA对MDR起正向调控作用。. 试验证明：分离MDR菌中耐三代头孢者存在ESBL、AmpC酶，耐利福平者存在rpoB突变，还证明耐喹乙醇、多西环素者存在oqxAB多药外排机制及四环素外排机制、核糖体蛋白保护机制，创新证明oqxAB多药外排也受marA的调控,揭示鸭大肠杆菌MDR表型是主动外排机制、外膜通透性改变、特异性机制共同作用的结果。本研究为有效防控鸭大肠杆菌感染提供了重要的新思路和理论依据。