原发性抗体缺陷病基因突变与表型研究

Primary antibody deficiencies (PAD) form the largest group of inherited disorders of the immune system, i.e., primary immunodeficiencies.They are characterized by a marked reduction or absence of serum immunoglobulins.The clinical presentations and the underlying immunopathological causes of PAD are diverse.Patients with a PAD can present either in early childhood or in adulthood with severe and recurrent bacterial infections and increased incidence of antoimmunol and lymphoproliferative disorders.The molecular pathology of PAD is based on genetic defects leading to a block in B cell differentiation,development and maturation,or affecting the class switch recombination process of immunoglobulins.In previous studies,we have finished the BTK mutation analysis of 70 patients with a marked reduction or absence of serum immunoglobulins.Among these patients,55 have BTK mutation and they are confirmed to be the patients of X-linked agammaglobulinemia.But the genetic defects in other 15 patients is still unknown. Furthermore,only gene mutations of BTK and IGHM have been reported in the researches of PAD in mainland China. In this study,we intend to do mutation analysis of candidate genes related to PAD in the patients with a marked reduction or absence of serum immunoglobulins using Next Generation Sequencing(NGS)based on Ion Torrent and Whole Exon Sequencing.Our purpose is to establish a systemic,efficient and reliable diagnostic procedure of PAD based on clinical manifestation,immunological phenotypies and molecular defects.We also want to make clear of the possible relationships between clinical features and immunological phenotypes and genotypes and also the relationships between protein expression levels and genotypes.

原发性抗体缺陷病是一组以外周血低或无丙种球蛋白为主要特点的疾病，也是原发性免疫缺陷病中最常见的一类疾病。该病的主要临床表现为发生于婴幼儿期或成年期的反复而严重的细菌感染，同时伴自身免疫性及淋巴增生性疾病的发生率增高。原发性抗体缺陷病的发病机制是由于基因突变影响B细胞的分化、发育及成熟，也可由于免疫球蛋白重排过程基因突变，导致患者血清中免疫球蛋白水平低下。本研究前期对70例临床表现为低或无丙种球蛋白血症的患者进行了BTK基因分析,55例存在基因突变，还有15例尚未明确可能的致病基因。而中国大陆对原发性抗体缺陷病的研究仅有BTK基因和IGHM基因突变的报道。本研究拟对在我院临床免疫科就诊的低或无丙种球蛋白血症患者，运用基于Ion Torrent 的二代测序技术和全外显子检测技术对PAD相关基因进行筛查分析，从临床、免疫表型和分子层面完善并明确疾病的诊断，探讨基因型和表型之间可能存在的关系。

原发性抗体缺陷病是一组以外周血低或无丙种球蛋白为主要特点的疾病，也是原发性免疫缺陷病中最常见的一类疾病。该病的主要临床表现为发生于婴幼儿期或成年期的反复而严重的细菌感染，同时伴自身免疫性及淋巴增生性疾病的发生率增高。由于原发性抗体缺陷病的症状严重，治疗困难，对患者、患者家庭和社会都带来巨大的负担。从基因水平对患者明确诊断对深入认识PAD，诊断和治疗以及优生优育具有重要的实用价值。已有20多种基因被发现与PAD的发生有关，但是仍有许多PAD基因诊断未明。本研究对临床诊断未明的原发性抗体缺陷病患者，完善临床资料统计搜集，包括临床表现、实验室检查、家族史、免疫接种史等，进行基因检测分析。使用Ampliseq技术设计PAD相关致病基因panel并运用基于Ion Torrent技术平台及全外显子组相结合的二代测序技术进行测序分析。共完成129例抗体缺陷病的二代测序检测及数据分析，其中有51例检测到致病的基因突变；建立了针对T淋巴细胞和B淋巴细胞精细免疫分型的流式检测技术，用于检测原发性抗体缺陷病患者不同淋巴细胞亚群的变化，为临床提供更精准的辅助诊断依据；对18例PI3Kδ缺陷患儿完善临床资料统计和分析以及免疫表型的分析从患者的临床表现、实验室检查、疾病起病年龄及基因突变类型等方面对中国大陆免疫缺陷病患儿的PI3Kδ基因突变特点及其对免疫系统的影响进行了分析；本研究发现PIK3CD及PIK3R1基因缺陷患者CD57阳性淋巴细胞亚群数量异常增高，通过检测临床拟诊患者CD57阳性细胞亚群水平可用于PI3K相关基因突变患者快速鉴别；对4例存在PIK3CD基因突变患者使用mTOR抑制剂雷帕霉素进行治疗并长期随访，采用多色荧光标记抗体流式细胞法，比较患儿用药前、用药1周、用药3月及用药6月等4个时间点外周血不同T细胞及B细胞亚群的数量、CD57+T淋巴细胞数量及PI3K通路信号分子磷酸化水平,同时对患者用药前后的临床表现进行比较分析，研究mTOR抑制剂对PI3Kδ缺陷患者免疫表型的影响。从实验室水平证明了雷帕霉素在治疗该类特殊的免疫缺陷病中的重要价值。为临床寻找原发性免疫缺陷病新的治疗靶点提供重要的实验室依据。

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