Minimally invasive determination of mRNA concentration in single living bacteria.
Minimally invasive determination of mRNA concentration in single living bacteria.
复制标题
DOI：
10.1093/nar/gkn329
复制
发表时间：
2008-07
影响因子：
14.9
通讯作者：
Cluzel, Philippe
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Guet, Calin C.;Bruneaux, Luke;Min, Taejin L.;Siegal-Gaskins, Dan;Figueroa, Israel;Emonet, Thierry;Cluzel, Philippe
荧光相关光谱（FCS）允许表征高浓度的非编码RNA在一个单一的活细菌。在这里，我们将FCS的使用扩展到单个活细胞中低浓度的编码RNA。我们将红色荧光蛋白（RFP）基因和RNA结合蛋白的两个结合位点进行基因融合，其翻译产物仅为RFP蛋白。使用这种结构，我们确定在单细胞中的绝对[mRNA]浓度和相关的[RFP]从诱导型质粒表达。我们发现，FCS方法使我们能够可靠地实时监测[mRNA]低至1040 nM（即每体积检测约两个转录本）。为了验证这些测量结果，我们发现[mRNA]与RFP蛋白的相关表达成正比。这种基于FCS的技术建立了一个框架，用于微创测量单个活细菌中的mRNA浓度。
Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) has permitted the characterization of high concentrations of noncoding RNAs in a single living bacterium. Here, we extend the use of FCS to low concentrations of coding RNAs in single living cells. We genetically fuse a red fluorescent protein (RFP) gene and two binding sites for an RNA-binding protein, whose translated product is the RFP protein alone. Using this construct, we determine in single cells both the absolute [mRNA] concentration and the associated [RFP] expressed from an inducible plasmid. We find that the FCS method allows us to reliably monitor in real-time [mRNA] down to ∼40 nM (i.e. approximately two transcripts per volume of detection). To validate these measurements, we show that [mRNA] is proportional to the associated expression of the RFP protein. This FCS-based technique establishes a framework for minimally invasive measurements of mRNA concentration in individual living bacteria.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1073/pnas.0404443101
发表时间：
2004-08-03
影响因子：
11.1
作者：
Golding, I;Cox, EC
通讯作者：
Cox, EC
影响因子：
48
作者：
Valencia-Burton, Maria;McCullough, Ron M.;Broude, Natalia E.
通讯作者：
Broude, Natalia E.
影响因子：
14.9
作者：
PEABODY, DS;ELY, KR
通讯作者：
ELY, KR
影响因子：
11.4
作者：
PEDERSEN, S
通讯作者：
PEDERSEN, S
影响因子：
14.9
作者：
Lutz, R;Bujard, H
通讯作者：
Bujard, H