An antibody with a variable-region coiled-coil "knob" domain.
An antibody with a variable-region coiled-coil "knob" domain.
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DOI：
10.1002/anie.201307939
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发表时间：
2014-01-03
影响因子：
16.6
通讯作者：
Schultz, Peter G.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang, Yong;Goswami, Devrishi;Wang, Danling;Wang, Tsung-Shing Andrew;Sen, Shiladitya;Magliery, Thomas J.;Griffin, Patrick R.;Wang, Feng;Schultz, Peter G.
牛抗体 (BLV1H12) 的 X 射线晶体结构揭示了其超长重链互补决定区 3 (CDR3H) 中的独特结构，该结构折叠成与二硫键交联“旋钮”结构域融合的溶剂暴露的 β 链“茎”。我们用反平行异二聚体卷曲螺旋基序取代了该抗体中的 β 链茎。所得抗体（Ab 螺旋）在哺乳动物细胞中表达，并且具有与亲本牛抗体相似的稳定性。 H-D 交换的 MS 分析支持取代肽的卷曲螺旋结构。用牛粒细胞集落刺激因子 (bGCSF) 取代 Ab 螺旋的旋钮结构域可产生稳定表达的嵌合抗体，该抗体可增殖小鼠 NFS-60 细胞，其效力与 bGCSF 相当。这项工作证明了这种新型卷曲螺旋 CDR3 基序作为生成具有有用药理学特性的稳定、有效的抗体融合蛋白的手段的实用性。
The X‐ray crystal structure of a bovine antibody (BLV1H12) revealed a unique structure in its ultralong heavy chain complementarity determining region 3 (CDR3H) that folds into a solvent‐exposed β‐strand “stalk” fused to a disulfide crosslinked “knob” domain. We have substituted an antiparallel heterodimeric coiled‐coil motif for the β‐strand stalk in this antibody. The resulting antibody (Ab‐coil) expresses in mammalian cells and has a stability similar to that of the parent bovine antibody. MS analysis of H–D exchange supports the coiled‐coil structure of the substituted peptides. Substitution of the knob‐domain of Ab‐coil with bovine granulocyte colony‐stimulating factor (bGCSF) results in a stably expressed chimeric antibody, which proliferates mouse NFS‐60 cells with a potency comparable to that of bGCSF. This work demonstrates the utility of this novel coiled‐coil CDR3 motif as a means for generating stable, potent antibody fusion proteins with useful pharmacological properties.
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