一回感染性ウイルス様粒子を用いたフラビウイルス脳炎における診断法の確立と実用化

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当所では、「Strep-tagを付加した北海道由来のダニ媒介脳炎ウイルスのウイルス様粒子」を抗原とするIgG-ELISA及びIgM捕捉ELISAを用いたスクリーニング検査を地方自治体で唯一実施し、患者の早期発見に貢献してきた。しかし、フラビウイルスの交差性の問題により、ELISAにおいて偽陽性が発生することは避けられず、確認検査として生ウイルスを用いたBSL-3施設における中和試験の実施が必要不可欠であった。そこで、本研究では、BSL-2施設で実施可能な「一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子」を用いた中和試験の開発を目的とした。2023年度は、①ウイルス様粒子を作製する工程の改良、②ウイルス様粒子と実際のヒト患者血清を用いた中和試験を実施した。①では、プラスミドのトランスフォーム工程において改良を必要とする部分が確認されたため、継続して実施している。具体的には、用いるコンピテントセル種の選定や、コロニーの選択方法を再検討中である。②では、ダニ媒介脳炎患者血清や、ダニ媒介脳炎を疑われたが検査によって否定された臨床検体などを用いて実施した。その結果、前者血清は一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子に中和抗体能を有し、後者血清は有さなかった。また、ELISAにおいて陽性・中和試験において陰性、となった検体では中和抗体能を有さなかった。これらは生ウイルスを用いた中和試験と同等の結果であり、一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子を用いた中和試験は、生ウイルスを用いた中和試験と同等の特異性を有することが示された。2024年度は、一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子を安定して作製させ、臨床検体を用いた検査数の増加を目指す。なお、本研究におけるヒト臨床検体の使用は、北海道立衛生研究所倫理審査委員会の承認を得て実施した。