Mechanisms of tunic softening in Halocynthia roretzi infected with a pathogenic flagellate, Azumiobodo hoyamushi

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我々はマボヤ被嚢軟化症の被嚢軟化機構に注目し、研究を進めている。これまでの研究結果から、軟化個体において、被嚢の主成分であるセルロースは分解されていないことが分かった。本課題では、Azumiobodo hoyamushi（ホヤムシ）が分泌するプロテアーゼが被嚢中のタンパク質を分解することで構造が崩壊すると仮説を立て、それを検証する。個別の目的としては、被嚢のプロテオーム解析を行い、軟化に伴って減少するタンパク質を探索する。それを大量発現し、抗体を作製する。作製した抗体を用いて、健常個体と軟化個体の被嚢を免疫染色することで、そのタンパク質が軟化に関わっているかを確認する。一方、ホヤムシのプロテアーゼに関しては、分泌性プロテアーゼが含まれる培養液を用いて、人工ペプチド基質の分解アッセイを行い、そのプロファイルから病原性因子を推測し、それを大量発現する。最終的には、in vitroで被嚢切片または大量発現した被嚢タンパク質に合成プロテアーゼを作用させることで、軟化を再現する。昨年度、2-D Fluorescence Difference Gel Electrophoresisおよびショットガン解析によって、軟化に伴い減少するタンパク質の検出には成功したものの、ターゲットタンパク質を絞り込むことができなかった。そこで、本年度は、これまでとは手法を変え、病理組織切片を作製し、肉眼で軟化している部分を確認し、レーザーマイクロダイセクション法にて、サンプル回収した。本サンプルをショットガン解析し、軟化に伴って減少する被嚢タンパク質を網羅的に解析し、減少するタンパク質を4つに絞り込んだ。ホヤムシのプロテアーゼに関しては、20個の人工合成基質を用いて、本虫が分泌するプロテアーゼのプロファイルを明らかにした。