Investigation of the transcriptional regulation of the Na+/I-symporter (NIS) gene in view of its use in radioiodine therapy of thyroid cancer

[3] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [4]在laufenden项目中，研究人员在研究中发现，在研究中，研究人员在研究中发现，在研究中，研究人员在研究中发现，在研究中，研究人员在研究中研究了nis启动子在转录和激素受体方面的特征。大北基因在广谱基因中，也有瞬态和稳定的转化基因，在广谱基因的转录和活性基因中，对内源性的NIS进行了初步研究。dass ß weist darauf hin, dass ß enintertionelle Mechanismen wie RNA-Stabilität work - sam sind, dass ß ß nis - transcription durch ‘顺式作用’ element gesteuert wind, dass ßerhalb der schon klonierten Regionen (welche insgesamt 5700bp基因组DNA umfassen) liegen。北京Möglichkeiten werden im vorliegenden Fortsetzungsantrag weiter untersucht。在einem ersten中，Teil将die AG die 3'-untranslatierte Region der NIS-cDNA, die bisher night bekant ist， klonieren和ire mögliche Rolle bei der transcriptioncharterisien。In einem zweiten (größeren) project jektteil将die AG detailliert die struckturr und functional des chromomalen NIS-Gens untersuchen， welches insgesamet 20000basenpaare unfast。Dazu werden研究了DNase-Verdau，并摄取了Zellkernen和nachfolgendem Southern-Blot 'DNase-hypersensitive Stellen' kartiert，以及具有增强剂和消音器激活作用的元素。Diese Regionen werden dann mittelels 'ligation- mediated ' (LM)-PCR) im Detail analysis, bebei Aussagen <s:1> ber die Bindung von transcriptionsfaktoren in der intakten Zelle möglich sind （'in vivolo -footprint '）。Mit den gleichen Methoden kann auch die mögliche甲基化与cpd -二核苷酸的遗传关系。

Im vorliegenden Fortsetzungsantrag soll die Charakterisierung der NIS-Gentranskription auf den chromosomalen Genlokus fokussiert werden. Im laufenden Projekt war eine umfassende Untersuchung vor allem mit Hilfe von Reportergenen beschrieben, wobei die Arbeitsgruppe verschiedene Transfektionsassays etabliert und die Wechselwirkung des NIS-Promoters mit Transkriptionsfaktoren und Hormonrezeptoren charakterisiert hat. Dabei ergab sich ein Widerspruch insoweit, als transient und stabil transfizierte NIS-Konstrukte in vielen Zellen transkriptionell aktiv waren, welche kein endogenes NIS exprimierten. Dies weist darauf hin, dass entweder posttranskriptionelle Mechanismen wie RNA-Stabilität wirksam sind, oder die NIS-Transkription durch 'cis-acting' Elemente gesteuert wird, die außerhalb der schon klonierten Regionen (welche insgesamt 5700bp genomische DNA umfassen) liegen. Beide Möglichkeiten werden im vorliegenden Fortsetzungsantrag weiter untersucht. In einem ersten Teil will die AG die 3'-untranslatierte Region der NIS-cDNA, die bisher nicht bekannt ist, klonieren und ihre mögliche Rolle bei der Transkription charakterisieren. In einem zweiten (größeren) Projektteil will die AG detailliert die Struktur und Funktion des chromosomalen NIS-Gens untersuchen, welches insgesamt über 20000 Basenpaare umfasst. Dazu werden zuerst mittels DNase-Verdau an intakten Zellkernen und nachfolgendem Southern-Blot 'DNase-hypersensitive Stellen' kartiert, welche oft wichtige Elemente wie Enhancer oder Silencer enthalten. Diese Regionen werden dann mittels 'ligation-mediate' (LM)-PCR) im Detail analysiert, wobei Aussagen über die Bindung von Transkriptionsfaktoren in der intakten Zelle möglich sind ('in vivo-footprinting'). Mit den gleichen Methoden kann auch die mögliche Methylierung von CpD-Dinucleotiden genau bestimmt werden.