The role of PKC Isotypes in cell adhesion, spreading an migration

在动物中，细胞-基质接触的形成对于胚胎发生和伤口愈合至关重要。这种结构的组装和动力学可以在组织培养中进行研究，并且已经发现大量蛋白质定位于这些接触位点的细胞质表面，在那里它们被认为将微丝末端连接到质膜。然而，对细胞-基质粘附位点的调控知之甚少，即它们在细胞内外信号反应中的组装、成熟和分解。在这里提出的项目中，我们想研究蛋白激酶C（PKC）在这些事件中的作用。初步数据描述了该激酶家族的几种同种型与肌动蛋白、粘着斑蛋白和塔林蛋白的相互作用，这些都是细胞-基质接触的重要组成部分。我们建议详细研究这些相互作用，并将这些研究扩展到其他细胞接触蛋白。我们将跟踪PKC同种型在细胞粘附、铺展和迁移过程中的易位。通过免疫荧光和通过GFP构建体转染细胞的CLS显微镜观察PKC与接触蛋白的共定位将与使用分离的重组蛋白、细胞分级分离、膜渗透交联剂和免疫沉淀的生化研究相结合。抑制剂和激活剂的研究将揭示在这些过程中的PKC活性和PKC依赖的磷酸化的接触蛋白的作用的信息。 胚胎发生和胚胎发育是对Zellen和Extrazellulären Matrix的两种接触的促进。结构和动力学是一种联系，形态学是一种结构的联系，它可以在韦尔登中找到。Zell-Matrix-Kontakstellen固定化Zellen的Zell-Matrix-Kontakstellen固定化Zell-Matrix-Kontak这是一个非常危险的现象，因为在超结构组织中，蛋白质可以通过跨膜蛋白质与整合家族韦尔登结合而形成微纤维。动力学解决了相互作用，组件的层次结构也通过外部和内部信号控制了联系培养，这一点还不为人知。在调节之前，Vorgänge将通过蛋白激酶C和“黏着斑激酶”的激酶来调节蛋白磷酸化过程。

In animals, formation of cell-matrix contacts is essential for embryogenesis and wound healing. Assembly and dynamics of such structures can be studied in tissue culture, and a large number of proteins have been found localized at the cytoplasmic face of these contact sites, where they are assumed to link microfilament ends to the plasma membrane. However, little is known on the regulation of cell-matrix adhesion sites, i.e. their assembly, maturation and disassembly in reaction to extra- and intracellular signals. In the project presented here, we would like to study the role of protein kinase C (PKC) in these events. Preliminary data describe the interactions of several isotypes of this kinase family with actin, vinculin and talin which are all essential components of cell-matrix contacts. We propose to study these interactions in detail and to expand these studies to other cell contact proteins. We will follow translocation of PKC isotypes during cell adhesion, spreading and migration. Colocalization of PKC with the contact proteins by immunofluorescence and by CLS microscopy of GFP-construct transfected cells will be combined with biochemical studies, using isolated recombinant proteins, cell fractionation, membrane-permeant crosslinkers and immuno-precipitation. Inhibitor and activator studies will reveal information on the role of PKC activity and PKC-dependent phosphorylation of contact proteins in these processes. Während der Embryogenese und der Wundheilung ist die Ausbildung von Kontakten zwischen Zellen und der extrazellulären Matrix ein Prozess von grundlegender Bedeutung. Aufbau und Dynamik solcher Kontakte, die morphologisch diskrete Strukturen darstellen, können in der Zellkultur untersucht werden. Auf der zytoplasmatischen Seite der vollständig ausgebildeten (reifen) Zell-Matrix-Kontakstellen stationärer Zellen wurde eine eindrucksvolle Zahl von Proteinen lokalisiert, die in vitro untereinander und mit Mikrofilamenten wechselwirken. Es wird daher angenommen, daß diese Proteine die membrannahen Enden der Mikrofilamente in Suprastrukturen organisieren, welche dann mit den Transmembran-Proteinen der Integrin-Familie verknüpft werden. Die Kinetik solcher Interaktionen, die Hierarchie der Komponenten sowie die Steuerung der Kontaktausbildung durch extra- und intrazelluläre Signale sind noch weitgehend unbekannt. Bei der Regulation dieser Vorgänge wird jedoch Proteinphosphorylierungs-Prozessen durch Kinasen wie der Proteinkinase C und der "focal adhesion kinase" eine große Bedeutung beigemessen.