Die Replikationsgabel-Barriere im rDNA-Locus der Maus als Kontra-Helikase

这是一个在基因组rDNA-Locus中建立一个连接基因屏障（RFB）的机制。这是通过TTFI定向抑制韦尔登进行的拉赫曼项目分析韦尔登。因此，在韦尔登中使用一个MCM 4、6、7-复合机的解决方案，可以使直升机的工作效率达到最高，使其具有最佳的固有性能。因此，需要在Insektenzellen koexplanert中选择三种MCM-蛋白质，以便进行韦尔登分析。Einzelstrang-Bindungsproteinen对MCM-复合物的Helikaseaktivität和RFB的Contrahelikaseaktivität的影响可被韦尔登所理解。因此，我们需要从TTFI中提取最佳蛋白质，这对于对照组来说是非常重要的。这将是一个韦尔登，当我们进行GC-reiche DNA-Sequenz时，TTFI-Bindungssequenz的结果会对对照产生影响。TTFI的分子杂交和RFB-Konstituente verstehen zu lernen，soll unsucht韦尔登，welche zellulären kationsproteine mit TTFI interagieren and welche Proteindomänen von TTFI für diese Wechselenkungen esseell sind.另一个目的是建立一个稳定siRNA表达的系统，在体内对TTFI的蛋白质敲低和靶向作用产生影响。

Ziel des Projektes ist, den Wirkmechanismus der Replikationsgabelbarriere (RFB) im rDNA-Locus des Maus-Genoms aufzuklären. Es soll im Rahmen dieses Projektes analysiert werden, ob Wirtszell-Helikasen durch TTFI orientierungsspezifisch inhibiert werden. Deshalb sollen Untersuchungen mit einem murinen MCM4,6,7-Komplex durchgeführt werden, da diesem Helikaseaktivität zugeschrieben wird, eine Aktivität, die wir in eigenen Vorversuchen bestätigen konnten. Hierfür sollen die drei MCM-Proteine in Insektenzellen koexprimiert, der Komplex gereinigt und dessen Helikaseaktivität enzymologisch analysiert werden. Der Einfluss von Einzelstrang-Bindungsproteinen auf die Helikaseaktivität des MCM-Komplexes und auf die Kontrahelikaseaktivität der RFB soll untersucht werden. Außerdem beabsichtigen wir, diejenigen Proteindomänen von TTFI zu bestimmen, die für die Kontrahelikaseaktivität essentiell sind. Es soll untersucht werden, ob und wenn ja wodurch eine GC-reiche DNA-Sequenz, die benachbart zur TTFI-Bindungssequenz liegt, die Kontrahelikaseaktivität beeinflusst. Um die molekulare Wirkungsweise von TTFI als Kontrahelikase und RFB-Konstituente verstehen zu lernen, soll untersucht werden, welche zellulären Replikationsproteine mit TTFI interagieren und welche Proteindomänen von TTFI für diese Wechselwirkungen essentiell sind. Ein weiteres Ziel ist die Anwendung eines Systems zur stabilen konditionalen Expression von siRNA, um Effekte eines Protein-Knock-down von TTFI auf das Ausmaß von Replikation und Replikationstermination in vivo untersuchen zu können.