PglB介导的一步合成多糖-蛋白缀合物疫苗平台构建
批准号:
31070824
项目类别:
面上项目
资助金额:
35.0 万元
负责人:
陈敏
依托单位:
学科分类:
生殖免疫与移植免疫
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
刘现伟、李磊、邹洋、党利君、房俊强、杨公进
中文摘要
多糖-蛋白缀合疫苗占目前使用的多糖疫苗的绝大多数。目前多糖-蛋白缀合疫苗生产多采用化学缀合方法,需要多步发酵和纯化过程,得率低,均一性差,成本高。本项目拟对最近才发现的细菌蛋白糖基化系统的寡糖基转移酶(PglB)进行研究,并将此系统和细菌脂多糖合成途径相偶联,最终构建一种新型、高效的多糖-蛋白缀合疫苗生产平台。本项目将以大肠杆菌O157:H7为研究模型,首先通过体外系统研究PglB对载体蛋白CRM197的底物适应性,并通过序列改造实现PglB对CRM197的一价和多价修饰,同时在模式宿主菌中构建细菌蛋白糖基化系统,利用此系统共表达O157:H7的O抗原多糖和载体蛋白CRM197,使其在宿主菌内缀合,从而建立PglB介导的多糖-蛋白缀合疫苗生产平台,实现通过一次发酵和纯化即可得到多糖-蛋白缀合疫苗的目的。此平台还可以扩展应用于其他病原菌的多糖-蛋白缀合物疫苗的生产。
英文摘要
根据PglB 底物特异性,对2种载体蛋白CRM197和大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)进行糖基化位点改造并完成了周质空间的表达。同时对宿主菌进行基因改造操作,将大肠杆菌O157:H7的O抗原合成基因簇转入宿主菌,实现特异O多糖的合成。在此基础上完成了 PglB的多糖-蛋白缀合疫苗平台的构建,对获得的多糖-蛋白缀合物进行检测。结果显示,CRM197和MBP均被糖基化。免疫实验发现多糖蛋白缀合物疫苗能够激起小鼠产生较高的抗O157的IgG抗体。同时发现多糖蛋白缀合物疫苗可活化Th1细胞,抑制Th2细胞活性。.以上结果表明我们已经成功构建O157的疫苗生产平台,并且此平台可以扩展应用于其他病原菌疫苗的生产。目前在学术刊物已经发表论文11篇,其中SCI文章9篇。整理好待投文章2篇。 培养硕士研究生6名(毕业3名),博士研究生2名。在该课题资助下,参加国际学术会议3次, 发表学术会议论文3篇。在国际国内形成了一定的影响,推动了相关科学研究的发展。
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biosynthesis of necleotide sugars by promiscuous udp-sugar pyrophosophorylase from arobdopsis thalina (Atusp)
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DOI:
--
发表时间:
2013
期刊:
Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters
影响因子:
2.7
作者:
[Wenjun Wang, Jie Shen, Peng George Wang, Min Chen]
通讯作者:
Min Chen
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DOI:
--
发表时间:
2013
期刊:
Glycoconjugate Journal
影响因子:
3
作者:
[min chen]
通讯作者:
min chen
DOI:
--
发表时间:
2012
期刊:
中国生物工程杂志
影响因子:
--
作者:
[刘骏, 陈敏]
通讯作者:
陈敏
DOI:
--
发表时间:
2011
期刊:
中国生物工程杂志
影响因子:
--
作者:
[杨公进, 马中瑞, 信国, 陈敏]
通讯作者:
陈敏
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DOI:
10.1007/s00253-011-3638-z
发表时间:
2012-02-01
期刊:
APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY
影响因子:
5
作者:
[Liang, Min, Chen, Min, Wang, Peng]
通讯作者:
Wang, Peng
共 10 条
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批准号:32070921
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项目类别:面上项目
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资助金额:58.0万元
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批准年份:2020
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负责人:陈敏
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负责人:陈敏
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批准年份:2012
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依托单位:
国内基金
海外基金