A reagentless biosensor for mRNA: a new tool to study transcription
A reagentless biosensor for mRNA: a new tool to study transcription
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mRNA 无试剂生物传感器：研究转录的新工具
DOI：
10.1101/142794
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Cook A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cook A
RNA聚合酶催化的基因表达是活细胞中最基本的过程之一。然而，目前研究它们活动的手段有限。大多数定量信使核糖核酸的方法都是基于对核酸的初步纯化。这会导致实验的不准确和产品的损失。在这里，我们描述了基于单链结合蛋白(SSB)的无试剂mRNA荧光生物传感器的使用。在本研究中，SSB表现出与其天然底物ssDNA类似的与mRNA的结合特性。此外，荧光标记的MDCC-SSB对单链DNA和单链RNA都有相同的荧光响应，且呈浓度依赖关系。当与RT-qPCR直接比较时，我们发现该生物传感器的重复性更好，纯化过程中没有产物丢失。因此，MDCC-SSB是一种比较测量体外转录后mRNA产量的新工具。
Gene expression, catalysed by RNA polymerases, is one of the most fundamental processes in living cells. Yet, the means to study their activity are currently limited. The majority of methods to quantify mRNA are based upon initial purification of the nucleic acid. This leads to experimental inaccuracies and loss of product. Here, we describe the use of a reagentless mRNA fluorescent biosensor based upon the single stranded binding (SSB) protein. In this study, SSB showed similar binding properties to mRNA, to that of its native substrate, ssDNA. Furthermore, fluorescently labelled MDCC-SSB gave the same fluorescence response with both ssDNA and ssRNA, in a concentration dependent manner. When directly compared to RT-qPCR, we found the biosensor to be more reproducible with no product lost through purification. Therefore, the MDCC-SSB is a novel tool for comparative measurement of mRNA yield followingin vitrotranscription.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(18)68829-5
发表时间：
1988-04
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
W. Bujalowski;Leslie B. Overman;T. Lohman
通讯作者：
W. Bujalowski;Leslie B. Overman;T. Lohman
色氨酸 54 和苯丙氨酸 60 协同参与大肠杆菌 SSB 蛋白与单链多核苷酸的结合
影响因子：
3.5
作者：
J. Casas;Mustafa I. Khamis;A. Maki;J. Chase
通讯作者：
J. Chase
影响因子：
14.9
作者：
Fili N;Mashanov GI;Toseland CP;Batters C;Wallace MI;Yeeles JT;Dillingham MS;Webb MR;Molloy JE
通讯作者：
Molloy JE
影响因子：
56.9
作者：
Pestic-Dragovich, L;Stojiljkovic, L;de Lanerolle, P
通讯作者：
de Lanerolle, P
影响因子：
14.9
作者：
SHIMAMOTO, N;IKUSHIMA, N;HORIE, K
通讯作者：
HORIE, K