Dynamin:GTP controls the formation of constricted coated pits, the rate limiting step in clathrin-mediated endocytosis.
Dynamin:GTP controls the formation of constricted coated pits, the rate limiting step in clathrin-mediated endocytosis.
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DOI：
10.1083/jcb.150.5.1137
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发表时间：
2000-09-04
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Schmid SL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sever S;Damke H;Schmid SL
GTPase动力蛋白对受体介导的内吞作用至关重要，但其功能仍存在争议。动力蛋白的一个结构域，被称为GTP酶效应结构域（GED），通过作为一个组装依赖的GAP来控制动力蛋白对GTP水解的高刺激率。Dyn（K694A）和Dyn（R725A）在GED中携带点突变，导致组装刺激的GTPase活性降低。在短暂过表达这两种激活突变体中的任何一种的细胞中，生物素化转铁蛋白更迅速地从亲和素中分离出来（Sever， S.， A.B. Muhlberg, and S.L. Schmid, 1999）。Nature. 398:481-486)，这表明受体介导的内吞作用的早期事件被加速了。通过对稳定转化细胞的阶段特异性分析和形态学分析，我们已经确定了网格蛋白包被囊泡形成中的哪些事件是由dyn（K694A）和dyn（R725A）的过表达加速的。这两种突变体都加速了收缩包被凹坑的形成，我们认为这是内吞作用的限速步骤。令人惊讶的是，dyn（R725A）的过表达（其主要缺陷是刺激GTP水解），而dyn（K694A）的过表达（其主要缺陷是自组装）却没有抑制膜裂变导致包被囊泡释放。总之，我们的数据支持一个模型，其中动力蛋白的功能就像经典的GTPase一样，是网格蛋白介导的内吞作用的关键调节因子。
The GTPase dynamin is essential for receptor-mediated endocytosis, but its function remains controversial. A domain of dynamin, termed the GTPase effector domain (GED), controls dynamin's high stimulated rates of GTP hydrolysis by functioning as an assembly-dependent GAP. Dyn(K694A) and dyn(R725A) carry point mutations within GED resulting in reduced assembly stimulated GTPase activity. Biotinylated transferrin is more rapidly sequestered from avidin in cells transiently overexpressing either of these two activating mutants (Sever, S., A.B. Muhlberg, and S.L. Schmid. 1999. Nature. 398:481–486), suggesting that early events in receptor-mediated endocytosis are accelerated. Using stage-specific assays and morphological analyses of stably transformed cells, we have identified which events in clathrin-coated vesicle formation are accelerated by the overexpression of dyn(K694A) and dyn(R725A). Both mutants accelerate the formation of constricted coated pits, which we identify as the rate limiting step in endocytosis. Surprisingly, overexpression of dyn(R725A), whose primary defect is in stimulated GTP hydrolysis, but not dyn(K694A), whose primary defect is in self-assembly, inhibited membrane fission leading to coated vesicle release. Together, our data support a model in which dynamin functions like a classical GTPase as a key regulator of clathrin-mediated endocytosis.
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突变动力蛋白的诱导特异性阻断内吞涂层囊泡的形成。
影响因子：
7.8
作者：
Damke, H;Baba, T;Warnock, D E;Schmid, S L
通讯作者：
Schmid, S L
影响因子：
4.8
作者：
Carr, JF;Hinshaw, JE
通讯作者：
Hinshaw, JE
影响因子：
3.2
作者：
Baba, T;Ueda, H;Ohno, S
通讯作者：
Ohno, S
影响因子：
3.6
作者：
KOENIG, JH;IKEDA, K
通讯作者：
IKEDA, K
影响因子：
21.3
作者：
Bleazard, W;McCaffery, JM;Shaw, JM
通讯作者：
Shaw, JM