In Situ Genetically Cascaded Amplification for Imaging RNA Subcellular Locations.
In Situ Genetically Cascaded Amplification for Imaging RNA Subcellular Locations.
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原位遗传级联的放大，以成像RNA亚细胞位置。
DOI：
10.1021/jacs.9b11748
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发表时间：
2020-02-12
影响因子：
15
通讯作者：
You M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ren K;Wu R;Karunanayake Mudiyanselage APKK;Yu Q;Zhao B;Xie Y;Bagheri Y;Tian Q;You M
原位扩增方法（例如杂交链式反应）是绘制目标分析物的空间分布和亚细胞位置的宝贵工具。然而，由于探针递送、降解和细胞毒性方面的挑战，这些方法的活细胞应用仍然受到限制。在此，我们报告了一种新颖的基因编码原位扩增方法，可对活细胞中 RNA 靶标的亚细胞位置进行非侵入性成像。在我们的系统中，荧光 RNA 报告基因西兰花被分成两个非荧光片段，并缀合到两条 RNA 发夹链的末端。然后，一个目标 RNA 的结合可以触发这些发夹对之间的级联杂交，从而激活多个西兰花荧光信号。我们已经证明，这种原位扩增策略可用于活细菌和哺乳动物细胞中各种 RNA 靶标的灵敏检测和定位成像。这种新的设计原理为跟踪各种细胞内分析物提供了一个有效且多功能的平台。
In situ amplification methods, such as hybridization chain reaction, are valuable tools for mapping the spatial distribution and subcellular location of target analytes. However, the live-cell applications of these methods are still limited due to challenges in the probe delivery, degradation and cytotoxicity. Herein, we report a novel genetically encoded in situ amplification method to non-invasively image the subcellular location of RNA targets in living cells. In our system, a fluorogenic RNA reporter, Broccoli, was split into two non-fluorescent fragments and conjugated to the end of two RNA hairpin strands. The binding of one target RNA can then trigger a cascaded hybridization between these hairpin pairs and thus activate multiple Broccoli fluorescence signal. We have shown that such in situ amplified strategy can be used for the sensitive detection and location imaging of various RNA targets in living bacterial and mammalian cells. This new design principle provides an effective and versatile platform for tracking various intracellular analytes.
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DOI：
10.1038/nrm3918
发表时间：
2015-02
期刊：
Nature reviews. Molecular cell biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1002/anie.201806482
发表时间：
2019-01-28
期刊：
Angewandte Chemie (International ed. in English)
影响因子：
--
作者：
Neubacher S;Hennig S
通讯作者：
Hennig S
影响因子：
15
作者：
Karunanayake Mudiyanselage APKK;Yu Q;Leon-Duque MA;Zhao B;Wu R;You M
通讯作者：
You M
DOI：
10.1073/pnas.0407024101
发表时间：
2004-10-26
影响因子：
11.1
作者：
Dirks, RM;Pierce, NA
通讯作者：
Pierce, NA
影响因子：
3.2
作者：
ALATOSSAVA, T;JUTTE, H;KELLENBERGER, E
通讯作者：
KELLENBERGER, E