Enzymatic Analysis of Reconstituted Archaeal Exosomes.
Enzymatic Analysis of Reconstituted Archaeal Exosomes.
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重建古菌外泌体的酶分析
DOI：
10.1007/978-1-4939-9822-7_4
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发表时间：
2020
影响因子：
--
通讯作者：
Gauernack
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Evguenieva-Hackenberg;Gauernack
古细菌外泌体是一种具有磷酸解活性的蛋白质复合物。它由含有古细菌Rrp 41和Rrp 42蛋白的催化活性六聚体环和异聚体RNA结合平台组成。该平台包含古细菌Rrp 4和Cs 14蛋白的异源三聚体（其具有S1和KH或Zn带RNA结合结构域），并且包含另外的古细菌特异性亚基。后者由古细菌DnaG蛋白和Nop 5代表，古细菌DnaG蛋白具有新的RNA结合结构域并与大多数外泌体同种型紧密相互作用，Nop 5被称为rRNA甲基化复合物的一部分，并被发现在稳定期后期与古细菌外泌体相关联。尽管在细胞中古细菌外泌体以具有异源三聚体Rrp 4-Csl 4-帽的不同同种型存在，但在体外，有可能重建具有限定的同源三聚体帽的复合物，并研究每个RNA结合亚基对外泌核糖核酸降解和RNA的多核苷酸化的影响。在这里，我们描述的程序，重建的异构体的硫磺硫化叶菌外泌体和设置的RNA降解和聚腺苷酸化测定。
The archaeal exosome is a protein complex with phosphorolytic activity. It is built of a catalytically active hexameric ring containing the archaeal Rrp41 and Rrp42 proteins, and a heteromeric RNA-binding platform. The platform contains a heterotrimer of the archaeal Rrp4 and Csl4 proteins (which harbor S1 and KH or Zn-ribbon RNA binding domains), and comprises additional archaea-specific subunits. The latter are represented by the archaeal DnaG protein, which harbors a novel RNA-binding domain and tightly interacts with the majority of the exosome isoforms, and Nop5, known as a part of an rRNA methylating complex and found to associate with the archaeal exosome at late stationary phase. Although in the cell the archaeal exosome exists in different isoforms with heterotrimeric Rrp4-Csl4-caps, in vitro it is possible to reconstitute complexes with defined, homotrimeric caps and to study the impact of each RNA-binding subunit on exoribonucleolytic degradation and on polynucleotidylation of RNA. Here we describe procedures for reconstitution of isoforms of theSulfolobus solfataricusexosome and for set-up of RNA degradation and polyadenylation assays.
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Bläsi U
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Evguenieva-Hackenberg E
进化上保守的亚基 Rrp4 和 Csl4 赋予古菌外泌体不同的底物特异性
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