Specific in situ hepatitis B viral double mutation (HBVDM) detection in urine with 60 copies ml(-1) analytical sensitivity in a background of 250-fold wild type without DNA isolation and amplification.
Specific in situ hepatitis B viral double mutation (HBVDM) detection in urine with 60 copies ml(-1) analytical sensitivity in a background of 250-fold wild type without DNA isolation and amplification.
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DOI：
10.1039/c4an01885k
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发表时间：
2015-03-07
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Shih WY
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kirimli CE;Shih WH;Shih WY
我们使用涂有与 HBVDM 互补的 16 核苷酸 (nt) 探针 DNA (pDNA) 的 (Pb(Mg1/3Nb2/3)O3)0.65(PbTiO3)0.35 (PMN-PT) 压电板传感器 (PEPS) 对尿液中的乙型肝炎病毒 1762T/1764A 双突变 (HBVDM) 进行原位检测。原位突变（MT）检测是在野生型（WT）背景下，PEPS垂直位于流的中心的流中进行的。为了进行验证，检测后在 MT 荧光报告微球 (FRM) (MT FRM) 和 WT FRM 的混合物中进行检测，这些微球发射不同的荧光颜色，并分别专门与 MT 和 WT 特异性结合。在 30°C 和 4 ml/min 下，PEPS 可以在 30 分钟内在临床相关 250 倍以上 WT 的背景下以 60 拷贝/ml 的分析灵敏度特异性原位检测 HBVDM，无需 DNA 分离、扩增或标记，这通过 FRM 检测后捕获的 MT FRM 和 WT FRM 的可视化进行验证，其中捕获的 MT FRM 数量是 WT FRM 的 5 至 5 倍。 1.
We have examined in situ detection of hepatitis B virus 1762T/1764A double mutation (HBVDM) in urine using a (Pb(Mg1/3Nb2/3)O3)0.65(PbTiO3)0.35 (PMN-PT) piezoelectric plate sensor (PEPS) coated with a 16-nucleotide (nt) probe DNA (pDNA) complementary to the HBVDM. The in situ mutation (MT) detection was carried out in a flow with the PEPS vertically situated at the center of the flow in a background of the wild type (WT). For validation, the detection was followed with detection in the mixture of MT fluorescent reporter microspheres (FRMs) (MT FRMs) and WT FRMs that emitted different fluorescent colours and were designed to specifically bind to MT and WT, respectively. At 30°C and 4 ml/min, a PEPS was shown to specifically detect HBVDM in situ with 60 copies/ml analytical sensitivity in a background of clinically-relevant 250-fold more WT in 30 min without DNA isolation, amplification, or labelling as validated by the visualization of the captured MT FRMs and WT FRMs following the FRMs detection where the captured MT FRMs outnumbered WT FRMs by a factor of 5 to 1.
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