Precise and efficient genome editing in zebrafish using the CRISPR/Cas9 system.
Precise and efficient genome editing in zebrafish using the CRISPR/Cas9 system.
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DOI：
10.1242/dev.115584
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发表时间：
2014-12
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Nüsslein-Volhard C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Irion U;Krauss J;Nüsslein-Volhard C
工程化位点特异性DNA内切酶的引入使许多模式生物和人类细胞中的精确基因组编辑成为可能。在斑马鱼中，已经成功地产生了功能丧失的等位基因;然而，尚未报道蛋白质标签或SNP交换的功能性靶向敲入的种系传递。在这里，我们通过表型拯救表明，CRISPR/Cas系统可用于以高效率和精确度靶向和修复斑马鱼中白化病（alb）基因座处的过早终止密码子。使用含有CRISPR靶位点的环状供体DNA，我们获得了接近50%的具有精确同源定向修复albb 4突变的幼虫，其中一小部分将种系中修复的等位基因传递给下一代（3/28成鱼）。在斑马鱼中精确SNP交换的生殖系传播的体内证明强调了其作为遗传研究模型的适用性。
The introduction of engineered site-specific DNA endonucleases has brought precise genome editing in many model organisms and human cells into the realm of possibility. In zebrafish, loss-of-function alleles have been successfully produced; however, germ line transmission of functional targeted knock-ins of protein tags or of SNP exchanges have not been reported. Here we show by phenotypic rescue that the CRISPR/Cas system can be used to target and repair a premature stop codon at the albino (alb) locus in zebrafish with high efficiency and precision. Using circular donor DNA containing CRISPR target sites we obtain close to 50% of larvae with precise homology-directed repair of the albb4 mutation, a small fraction of which transmitted the repaired allele in the germ line to the next generation (3/28 adult fish). The in vivo demonstration of germ line transmission of a precise SNP exchange in zebrafish underscores its suitability as a model for genetic research.
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