Highly multiplexed genome engineering using CRISPR/Cas9 gRNA arrays.
Highly multiplexed genome engineering using CRISPR/Cas9 gRNA arrays.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0198714
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Moriarity BS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kurata M;Wolf NK;Lahr WS;Weg MT;Kluesner MG;Lee S;Hui K;Shiraiwa M;Webber BR;Moriarity BS
CRISPR/Cas9系统是一种RNA引导的核酸酶系统，是细菌适应性免疫的一种机制。该系统已被许多基因组工程应用于研究和最近的治疗。CRISPR/Cas9系统主要是通过在pol III启动子（如U6）的表达下，将Cas9作为蛋白质、RNA或质粒与嵌合的crRNA-tracrRNA引导RNA （gRNA）一起递送。利用这种方法，通过传递多个U6-gRNA质粒靶向多个基因座，实现了多重基因组工程。然而，这种方法由于一次将多个质粒递送到单个细胞的效率而受到限制。为了提高多重基因组工程的能力和可及性，我们开发了一种高效的基于金门的方法来组装由最佳Csy4核糖核酸酶序列连接的gRNA，以提供多达10个gRNA作为单个gRNA阵列转录物。在这里，我们报告了我们的引导RNA阵列在强pol II启动子下的最佳表达。该系统可以与无数的CRISPR应用程序一起实施，允许用户模拟需要大量grna的复杂生物过程。
The CRISPR/Cas9 system is an RNA guided nuclease system that evolved as a mechanism of adaptive immunity in bacteria. This system has been adopted for numerous genome engineering applications in research and recently, therapeutics. The CRISPR/Cas9 system has been largely implemented by delivery of Cas9 as protein, RNA, or plasmid along with a chimeric crRNA-tracrRNA guide RNA (gRNA) under the expression of a pol III promoter, such as U6. Using this approach, multiplex genome engineering has been achieved by delivering several U6-gRNA plasmids targeting multiple loci. However, this approach is limited due to the efficiently of delivering multiple plasmids to a single cell at one time. To augment the capability and accessibility of multiplexed genome engineering, we developed an efficient golden gate based method to assemble gRNAs linked by optimal Csy4 ribonuclease sequences to deliver up to 10 gRNAs as a single gRNA array transcript. Here we report the optimal expression of our guide RNA array under a strong pol II promoter. This system can be implemented alongside the myriad of CRISPR applications, allowing users to model complex biological processes requiring numerous gRNAs.
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影响因子：
14.9
作者：
Balasubramanian D;Schneper L;Kumari H;Mathee K
通讯作者：
Mathee K
影响因子：
46.9
作者：
Tsai, Shengdar Q.;Wyvekens, Nicolas;Khayter, Cyd;Foden, Jennifer A.;Thapar, Vishal;Reyon, Deepak;Goodwin, Mathew J.;Aryee, Martin J.;Joung, J. Keith
通讯作者：
Joung, J. Keith
影响因子：
64.8
作者：
Konermann S;Brigham MD;Trevino AE;Joung J;Abudayyeh OO;Barcena C;Hsu PD;Habib N;Gootenberg JS;Nishimasu H;Nureki O;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
影响因子：
4.6
作者：
Sakuma T;Nishikawa A;Kume S;Chayama K;Yamamoto T
通讯作者：
Yamamoto T
DOI：
10.1038/nri2635
发表时间：
2009-10
期刊：
Nature reviews. Immunology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
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