Control of transposase activity within a transpososome by the configuration of the flanking DNA segment of the transposon.
Control of transposase activity within a transpososome by the configuration of the flanking DNA segment of the transposon.
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通过转座子侧翼 DNA 片段的配置来控制转座体内的转座酶活性。
DOI：
10.1073/pnas.0706556104
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发表时间：
2007
影响因子：
11.1
通讯作者：
Mizuuchi,Kiyoshi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mizuuchi,Michiyo;Rice,PhoebeA;Wardle,SimonJ;Haniford,DavidB;Mizuuchi,Kiyoshi
DNA转座的多个步骤发生在一个称为转座体的大复合体中，其中一对转座子DNA末端与转座酶蛋白的多聚体突触连接。最后一步是DNA链转移反应，将转座子末端连接到靶DNA链上，不需要高能化学键数量的净变化。生理学要求，尽管与转座体保持稳定结合，但链转移产物既不经历逆反应，也不经历任何进一步的切割反应。因此，当Mu或Tn10链转移复合物在体外通过转座酶催化的反应步骤产生时，逆反应是检测不到的。相反，当Mu或Tn10链转移复合物由已经具有链转移产物结构的DNA组装时，我们检测到类似于靶DNA链转移逆转的反应。含硫代磷酸酯的底物的立体选择性表明，该反应作为正常靶DNA链转移步骤的假逆转进行。密切相关的Mu底物DNA结构的反应性的比较表明，转座子序列外的侧翼DNA的构型在防止链转移步骤后的转座子末端切割反应中起关键作用。
The multiple steps of DNA transposition take place within a large complex called the transpososome, in which a pair of transposon DNA ends are synapsed by a multimer of the transposase protein. The final step, a DNA strand transfer reaction that joins the transposon ends to the target DNA strands, entails no net change in the number of high-energy chemical bonds. Physiology demands that, despite remaining stably associated with the transpososome, the strand transfer products undergo neither the reverse reaction nor any further cleavage reactions. Accordingly, when the Mu or Tn10 strand transfer complex was producedin vitrothrough transposase-catalyzed reaction steps, reverse reactions were undetectable. In contrast, when the Mu or Tn10 strand transfer complexes were assembled from DNA already having the structure of the strand transfer product, we detected a reaction that resembled reversal of target DNA strand transfer. The stereoselectivity of phosphorothioate-containing substrates indicated that this reaction proceeds as the pseudoreversal of the normal target DNA strand transfer step. Comparison of the reactivity of closely related Mu substrate DNA structures indicated that the configuration of the flanking DNA outside of the transposon sequence plays a key role in preventing the transposon end cleavage reaction after the strand transfer step.
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