Chromosome orientation fluorescence in situ hybridization to study sister chromatid segregation in vivo.
Chromosome orientation fluorescence in situ hybridization to study sister chromatid segregation in vivo.
复制标题
DOI：
10.1038/nprot.2010.102
复制
发表时间：
2010-07
期刊：
影响因子：
14.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
以前，姐妹染色单体分离模式的分析依赖于掺入BrdU和间接方法来推断两次细胞分裂后的分离模式。在这里，我们描述了一种差异标记小鼠细胞姐妹染色单体的方法，并通过采用成熟的染色体定位荧光原位杂交(CO-FISH)技术，在体外和体内直接检测一个细胞分裂后的姐妹染色单体分离模式。5-溴-2‘-脱氧尿苷(BrdU)被掺入新形成的DNA链中，然后经过光解和核酸外切酶消化，产生只含有亲本模板DNA的单链姐妹染色单体。这种单链姐妹染色单体使用与荧光标记相连的主要卫星序列的单向探针进行差异标记。用荧光显微镜观察有丝分裂后细胞中差异标记的姐妹染色单体，可以在一个细胞分裂后直接检测姐妹染色单体的分离模式。对于体内的小鼠组织来说，这一过程需要四天，对于体外培养的细胞来说，需要两天。
Previously, assays for sister chromatid segregation patterns relied on incorporation of BrdU and indirect methods to infer segregation patterns after two cell divisions. Here we describe a method to differentially label sister chromatids of murine cells and directly assay sister chromatid segregation patterns following one cell division in vitro and in vivo by adaptation of the well-established CO-FISH (chromosome orientation fluorescent in situ hybridization) technique. 5-bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) is incorporated into newly-formed DNA strands, followed by photolysis and exonuclease digestion to create single-stranded sister chromatids containing parental template DNA only. Such single-stranded sister chromatids are differentially labeled using unidirectional probes to major satellite sequences coupled to fluorescent markers. Differentially-labeled sister chromatids in post-mitotic cells are visualized using fluorescence microscopy and sister chromatid segregation patterns can be directly assayed after one cell division. This procedure requires four days for in vivo mouse tissues, and two days for in vitro cultured cells.
登录
查看更多内容
影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
14.9
作者：
HORZ, W;ALTENBURGER, W
通讯作者：
ALTENBURGER, W
影响因子：
21.3
作者：
Shinin, Vasily;Gayraud-Morel, Barbara;Tajbakhsh, Shahragim
通讯作者：
Tajbakhsh, Shahragim
DOI：
10.1073/pnas.98.1.171
发表时间：
2001-01-02
影响因子：
11.1
作者：
Garagna, S;Marziliano, N;Redi, CA
通讯作者：
Redi, CA
影响因子：
3.5
作者：
Lansdorp, PM;Verwoerd, NP;Tanke, HJ
通讯作者：
Tanke, HJ