Traceless Cleavage of Protein-Biotin Conjugates under Biologically Compatible Conditions.
Traceless Cleavage of Protein-Biotin Conjugates under Biologically Compatible Conditions.
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DOI：
10.1002/cbic.201700214
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发表时间：
2017-09-05
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Gray J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cowell J;Buck M;Essa AH;Clarke R;Vollmer W;Vollmer D;Hilkens CM;Isaacs JD;Hall MJ;Gray J
胺的生物素化被广泛用于缀合生物分子，但所得标记是不可去除的，或者其去除在目标分子上留下标签，从而影响下游过程。我们在这里提出了一套试剂（RevAmines），允许在生物相容的温和条件下进行无痕、可逆的生物素化。基于抗生物素蛋白的捕获后的释放是通过在温和条件（200 mm碳酸氢铵，pH 8，16-24 h，室温）下裂解（2-（烷基磺酰基）乙基）氨基甲酸酯接头来实现的，其再生未修饰的胺。 证明了从中性亲和素捕获和释放生物素化的蛋白质和肽，通过在细胞表面可逆的生物素化的荧光标记和从细菌周质选择性富集蛋白质。这些标签易于制备，稳定，并为未来在蛋白质组学，基于活性的蛋白质分析，亲和色谱和生物分子标记和纯化中的应用提供了潜力。
Biotinylation of amines is widely used to conjugate biomolecules, but either the resulting label is non‐removable or its removal leaves a tag on the molecule of interest, thus affecting downstream processes. We present here a set of reagents (RevAmines) that allow traceless, reversible biotinylation under biologically compatible, mild conditions. Release following avidin‐based capture is achieved through the cleavage of a (2‐(alkylsulfonyl)ethyl) carbamate linker under mild conditions (200 mm ammonium bicarbonate, pH 8, 16–24 h, room temperature) that regenerates the unmodified amine. The capture and release of biotinylated proteins and peptides from neutravidin, fluorescent labelling through reversible biotinylation at the cell surface and the selective enrichment of proteins from bacterial periplasm are demonstrated. The tags are easily prepared, stable and offer the potential for future application in proteomics, activity‐based protein profiling, affinity chromatography and bio‐molecule tagging and purification.
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