Cleavable biotin probes for labeling of biomolecules via azide-alkyne cycloaddition.
Cleavable biotin probes for labeling of biomolecules via azide-alkyne cycloaddition.
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DOI：
10.1021/ja1083909
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发表时间：
2010-12-29
影响因子：
15
通讯作者：
Tirrell DA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Szychowski J;Mahdavi A;Hodas JJ;Bagert JD;Ngo JT;Landgraf P;Dieterich DC;Schuman EM;Tirrell DA
叠氮化物-炔环加成为蛋白质、核酸、聚糖和脂类的生物正交标记提供了强有力的工具。在一些标记实验中，例如在涉及亲和纯化和质谱的蛋白质组学研究中，使用可切割探针可以方便地在温和条件下释放标记的生物分子。描述了五种可切割的生物素探针，用于通过叠氮化物-炔环加成标记蛋白质和其他生物分子。在与代谢标记蛋白结合后，这些探针被50mm Na2S2O4、2% HOCH2CH2SH、10% HCO2H、95% CF3CO2H或365 nm辐照裂解。最引人注目的是，在二氧二苯硅烷（DADPS）连接体周围构建的探针在10%的HCO2H处理0.5小时后被发现有效地切割。使用一个模型GFP蛋白来证明DADPS探针进行了高度选择性的偶联，并在切割后在标记的蛋白上留下一个小的（143 Da）质量标签。这些特点使DADPS探针在生物分子标记和蛋白质组学研究中特别有吸引力。
The azide-alkyne cycloaddition provides a powerful tool for bio-orthogonal labeling of proteins, nucleic acids, glycans, and lipids. In some labeling experiments, e.g., in proteomic studies involving affinity purification and mass spectrometry, it is convenient to use cleavable probes that allow release of labeled biomolecules under mild conditions. Five cleavable biotin probes are described for use in labeling of proteins and other biomolecules via the azide – alkyne cycloaddition. Subsequent to conjugation with metabolically labeled protein, these probes are subject to cleavage with either 50 mM Na2S2O4, 2% HOCH2CH2SH, 10% HCO2H, 95% CF3CO2H, or irradiation at 365 nm. Most strikingly, a probe constructed around a dialkoxydiphenylsilane (DADPS) linker was found to be cleaved efficiently when treated with 10% HCO2H for 0.5 h. A model GFP protein was used to demonstrate that the DADPS probe undergoes highly selective conjugation and leaves a small (143 Da) mass tag on the labeled protein after cleavage. These features make the DADPS probe especially attractive for use in biomolecular labeling and proteomic studies.
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DOI：
10.1073/pnas.0605418103
发表时间：
2006-08-15
影响因子：
11.1
作者：
Sawa, Masaaki;Hsu, Tsui-Ling;Wong, Chi-Huey
通讯作者：
Wong, Chi-Huey
影响因子：
15
作者：
Rabuka, David;Hubbard, Sarah C.;Bertozzi, Carolyn R.
通讯作者：
Bertozzi, Carolyn R.
影响因子：
14.8
作者：
Link, A. James;Vink, Mandy K. S.;Tirrell, David A.
通讯作者：
Tirrell, David A.
影响因子：
14.8
作者：
Ngo, John T.;Champion, Julie A.;Tirrell, David A.
通讯作者：
Tirrell, David A.
DOI：
10.1073/pnas.82.9.2593
发表时间：
1985-01-01
影响因子：
11.1
作者：
SHIMKUS, M;LEVY, J;HERMAN, T
通讯作者：
HERMAN, T