A Comprehensive Quantitative Assay for Amine Transaminases
A Comprehensive Quantitative Assay for Amine Transaminases
复制标题
胺转氨酶的综合定量测定
DOI：
10.1002/cctc.201901430
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
4.5
通讯作者：
Cairns R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cairns R
通过从大型突变体库中快速鉴定所需的变异体，有效的高通量筛选分析的发展极大地促进了可用的设计酶的丰富。在这里，我们报告了一种通用的、操作简单的转氨酶终点法，它能够在液相中筛选胺供体和受体。基于分光光度的筛选利用了胺给体2-氨基乙基苯胺(2-AEA)，并依赖于 中生成的吲哚与埃利希试剂的反应。该分析还被修改为允许通过添加吲哚和随后的分光光度分析在相反方向上进行筛选。重要的是，该筛选提供了关于单个生物催化剂对映体偏好的定性信息。为了提高分析的吞吐量，产生了一个缺乏色氨酸酶活性的工程表达菌株(E.coliBL21(DE3)ΔTNAA)，以实现对琼脂平板上排列的单个菌落的可靠和直接的评估。
The development of effective high‐throughput screening assays has contributed greatly to the wealth of designer enzymes available, by enabling rapid identification of desired variants from large mutant libraries. Here, we report a general and operationally simple end‐point assay for transaminases that enables the screening of both amine donors and acceptors in liquid phase. The spectrophotometric‐based screen exploits the amine donor 2‐aminoethylaniline (2‐AEA) and relies on reaction ofin situgenerated indole with Ehrlich's reagent. The assay has also been adapted to allow screening in the reverse direction by addition of indole and subsequent spectrophotometric analysis. Importantly, the screen provides qualitative information on the enantio‐preference of the individual biocatalysts. To increase the assay throughput, an engineered expression strain (E. coliBL21(DE3) ΔtnaA) lacking tryptophanase activity, was generated to enable reliable and direct evaluation of individual colonies arrayed on agar plates.
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用于立体选择性合成药学相关双环胺的胺转氨酶的蛋白质工程。
影响因子：
3.2
作者：
M. Weiß;Ioannis V. Pavlidis;P. Spurr;S. Hanlon;B. Wirz;H. Iding;U. Bornscheuer
通讯作者：
U. Bornscheuer
DOI：
10.1016/j.cogsc.2017.06.002
发表时间：
2017-10-01
影响因子：
9.3
作者：
Hammer, Stephan C.;Knight, Anders M.;Arnold, Frances H.
通讯作者：
Arnold, Frances H.
基于甘氨酸氧化酶的高通量固相测定，用于 (R)-和 (S)-选择性胺转氨酶的底物分析和定向进化。
影响因子：
7.4
作者：
M. Weiß;Ioannis V. Pavlidis;Clare Vickers;M. Höhne;U. Bornscheuer
通讯作者：
U. Bornscheuer
影响因子：
4.9
作者：
Baud, D.;Ladkau, N.;Hailes, H. C.
通讯作者：
Hailes, H. C.
影响因子：
4.5
作者：
Steffen-Munsberg, Fabian;Vickers, Clare;Hoehne, Matthias
通讯作者：
Hoehne, Matthias