An alpha motif at Tas3 C terminus mediates RITS cis spreading and promotes heterochromatic gene silencing.
An alpha motif at Tas3 C terminus mediates RITS cis spreading and promotes heterochromatic gene silencing.
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DOI：
10.1016/j.molcel.2009.02.032
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发表时间：
2009-04-24
期刊：
影响因子：
16
通讯作者：
Moazed, Danesh
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li, Haitao;Motamedi, Mohammad R.;Yip, Calvin K.;Wang, Zhanxin;Walz, Thomas;Patel, Dinshaw J.;Moazed, Danesh
RNA干扰（RNAi）在裂殖酵母着丝粒异染色质的形成中起着关键作用。RNA诱导的转录沉默（RITS）复合物由异染色质小干扰RNA（siRNA）、siRNA结合蛋白Ago 1、Chromodomain蛋白Chp 1和Ago 1/Chp 1相互作用蛋白Tas 3组成，在RNAi和异染色质组装途径之间提供物理系链。在这里，我们报告的C-末端Tas 3 α-螺旋基序（TAM）的结构和功能特性，自缔合成螺旋聚合物，并需要在着丝粒DNA区域的RITS顺式扩展。疏水单体-单体界面内的关键残基的定点突变在体外破坏Tas 3-TAM聚合物自缔合，并导致基因沉默的丧失、RITS的扩散和体内着丝粒siRNA的急剧减少。这些结果表明，除了Chp 1和siRNA负载的Ago 1的染色体结构域，Tas 3自缔合是RITS传播和有效的异染色质基因沉默在着丝粒重复区域所必需的。
RNA interference (RNAi) plays a pivotal role in the formation of heterochromatin at the fission yeast centromeres. The RNA-induced transcriptional silencing (RITS) complex, composed of heterochromatic small interfering RNAs (siRNAs), the siRNA-binding protein Ago1, the chromodomain protein Chp1, and the Ago1/Chp1-interacting protein Tas3, provides a physical tether between the RNAi and heterochromatin assembly pathways. Here, we report the structural and functional characterization of a C-terminal Tas3 α-helical motif (TAM), which self-associates into a helical polymer and is required for cis spreading of RITS in centromeric DNA regions. Site-directed mutations of key residues within the hydrophobic monomer-monomer interface disrupt Tas3-TAM polymeric self-association in vitro and result in loss of gene silencing, spreading of RITS, and a dramatic reduction in centromeric siRNAs in vivo. These results demonstrate that, in addition to the chromodomain of Chp1 and siRNA-loaded Ago1, Tas3 self-association is required for RITS spreading and efficient heterochromatic gene silencing at centromeric repeat regions.
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影响因子：
16
作者：
Motamedi, Mohammad R.;Hong, Eun-Jin Erica;Li, Xue;Gerber, Scott;Denison, Carilee;Gygi, Steven;Moazed, Danesh
通讯作者：
Moazed, Danesh
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作者：
Buehler, Marc;Haas, Wilhelm;Moazed, Danesh
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Noma, K;Sugiyama, T;Grewal, SIS
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Grewal, SIS
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Kim, CA;Bowie, JU
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Bowie, JU