Generation of a homozygous mutant drug transporter (ABCB1) knockout line in the sea urchin Lytechinus pictus.
Generation of a homozygous mutant drug transporter (ABCB1) knockout line in the sea urchin Lytechinus pictus.
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DOI：
10.1242/dev.200644
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发表时间：
2022-06-01
期刊：
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通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
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作者：
海胆是研究早期发育的首要模式生物。然而，常用物种的漫长世代时间排除了稳定遗传方法的应用。在这里，我们使用的彩绘海胆Lytechinus pictus来解决这个限制，并产生一个纯合突变海胆线。L. pictus是目前使用的所有海胆中繁殖时间最短的一种。我们利用这一优势产生了药物转运蛋白ABCB 1的海胆同源物的敲除突变体，ABCB 1是所有动物的外源性处置的主要参与者。使用CRISPR/Cas9，我们产生了ABCB 1的大片段缺失，并使用这些容易检测到的缺失来快速基因分型和繁殖突变动物，使其在F2代中纯合。敲除幼虫根据预期的孟德尔分布产生，表现出降低的异生物质流出活性，并且可以生长至成熟。这项研究是朝着更复杂的海胆遗传操作和建立可再生的海胆动物资源迈出的重要一步。总结：通过产生药物转运蛋白ABCB 1/P-糖蛋白的纯合突变体敲除，实现了红癍绿绒螯蟹作为急需的遗传使能海胆资源的效用。
Sea urchins are premier model organisms for the study of early development. However, the lengthy generation times of commonly used species have precluded application of stable genetic approaches. Here, we use the painted sea urchin Lytechinus pictus to address this limitation and to generate a homozygous mutant sea urchin line. L. pictus has one of the shortest generation times of any currently used sea urchin. We leveraged this advantage to generate a knockout mutant of the sea urchin homolog of the drug transporter ABCB1, a major player in xenobiotic disposition for all animals. Using CRISPR/Cas9, we generated large fragment deletions of ABCB1 and used these readily detected deletions to rapidly genotype and breed mutant animals to homozygosity in the F2 generation. The knockout larvae are produced according to expected Mendelian distribution, exhibit reduced xenobiotic efflux activity and can be grown to maturity. This study represents a major step towards more sophisticated genetic manipulation of the sea urchin and the establishment of reproducible sea urchin animal resources. Summary: The utility of Lytechinus pictus as a much needed genetically enabled sea urchin resource is achieved through the generation of a homozygous mutant knockout of the drug transporter ABCB1/P-glycoprotein.
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DOI：
10.1139/o92-160
发表时间：
1992-10-01
期刊：
BIOCHEMISTRY AND CELL BIOLOGY-BIOCHIMIE ET BIOLOGIE CELLULAIRE
影响因子：
--
作者：
CSERJESI, P;FAIRLEY, P;BRANDHORST, BP
通讯作者：
BRANDHORST, BP
影响因子：
64.5
作者：
EVANS, T;ROSENTHAL, ET;HUNT, T
通讯作者：
HUNT, T
影响因子：
4.8
作者：
Goekirmak, Tufan;Campanale, Joseph P.;Hamdoun, Amro
通讯作者：
Hamdoun, Amro
DOI：
10.1007/978-1-0716-1904-9_1
发表时间：
2022-01-01
期刊：
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
影响因子：
--
作者：
Pal, Debadrita;Visconti, Florencia;Shuster, Charles B
通讯作者：
Shuster, Charles B
P-糖蛋白多蛋白多蛋白多蛋白的分子基础（ABCB1）：最近的生化和结构研究。
影响因子：
--
作者：
Chufan EE;Sim HM;Ambudkar SV
通讯作者：
Ambudkar SV