Formins filter modified actin subunits during processive elongation.
Formins filter modified actin subunits during processive elongation.
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DOI：
10.1016/j.jsb.2011.10.005
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发表时间：
2012-01
影响因子：
3
通讯作者：
Pollard, Thomas D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen, Qian;Nag, Shalini;Pollard, Thomas D.
裂变酵母细胞排斥来自细胞动力学收缩环的荧光蛋白标记的肌动蛋白亚基，因此胞质分裂失败，当天然肌动蛋白基因被GFP-肌动蛋白取代时细胞死亡。由于缺乏荧光肌动蛋白探针，阻碍了收缩环中肌动蛋白丝动力学的详细研究，并留下了关于胞质分裂机制的悬而未决的问题。为了将荧光肌动蛋白的收缩环，研究其动力学，我们介绍了一个四半胱氨酸基序（FLNCCPGCCMEP）的编码序列在10个位置的裂变酵母肌动蛋白基因和表达的突变蛋白从天然肌动蛋白基因座的二倍体细胞与野生型肌动蛋白的其他染色体上。我们用FlAsH试剂标记活细胞内的这些标记肌动蛋白。细胞将这些标记的肌动蛋白中的一些并入内吞作用位点处的肌动蛋白斑块中，其中Arp 2/3复合物使所有肌动蛋白丝成核。然而，细胞没有将任何FlAsH-肌动蛋白纳入收缩环。因此，Cdc 12 p拒绝肌动蛋白亚基与标签的~2 kDa，说明严格的结构要求，这种形式分钟，以促进肌动蛋白丝倒刺末端的伸长，因为它移动procedently沿着一个不断增长的细丝的结束。
Fission yeast cells reject actin subunits tagged with a fluorescent protein from the cytokinetic contractile ring, so cytokinesis fails and the cells die when the native actin gene is replaced by GFP–actin. The lack of a fluorescent actin probe has prevented a detailed study of actin filament dynamics in contractile rings, and left open questions regarding the mechanism of cytokinesis. To incorporate fluorescent actin into the contractile ring to study its dynamics, we introduced the coding sequence for a tetracysteine motif (FLNCCPGCCMEP) at 10 locations in the fission yeast actin gene and expressed the mutant proteins from the native actin locus in diploid cells with wild-type actin on the other chromosome. We labeled these tagged actins inside live cells with the FlAsH reagent. Cells incorporated some of these labeled actins into actin patches at sites of endocytosis, where Arp2/3 complex nucleates all of the actin filaments. However, the cells did not incorporate any of the FlAsH-actins into the contractile ring. Therefore, formin Cdc12p rejects actin subunits with a tag of ~2 kDa, illustrating the stringent structural requirements for this for-min to promote the elongation of actin filament barbed ends as it moves processively along the end of a growing filament.
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DOI：
10.1083/jcb.143.6.1603
发表时间：
1998-12-14
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Bähler J;Steever AB;Wheatley S;Wang Yl;Pringle JR;Gould KL;McCollum D
通讯作者：
McCollum D
影响因子：
64.8
作者：
Otomo, T;Tomchick, DR;Rosen, MK
通讯作者：
Rosen, MK
影响因子：
7.5
作者：
Gerisch, G;Weber, I
通讯作者：
Weber, I
影响因子：
9.2
作者：
Paul, Aditya;Pollard, Thomas
通讯作者：
Pollard, Thomas
影响因子：
9.2
作者：
Feierbach, B;Chang, F
通讯作者：
Chang, F