Cross priming amplification: mechanism and optimization for isothermal DNA amplification.
Cross priming amplification: mechanism and optimization for isothermal DNA amplification.
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DOI：
10.1038/srep00246
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发表时间：
2012
影响因子：
4.6
通讯作者：
You Q
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xu G;Hu L;Zhong H;Wang H;Yusa S;Weiss TC;Romaniuk PJ;Pickerill S;You Q
CPA是一类等温扩增反应，其通过链置换DNA聚合酶进行，并且不需要初始变性步骤或添加切口酶。在63°C的测定温度下，在DNA模板中瞬时自发变性气泡处形成引物-模板杂交体比通过相对于模板DNA的高浓度引物进行的模板链的再退火更有利。通过5′端与模板链不互补的交叉引物的退火和交叉引物上游置换引物的结合促进链置换。所产生的靶DNA的指数扩增是高度特异性和高度敏感性的，从少至四个细菌细胞产生扩增子。在这里，我们报告的基本CPA机制-单交叉CPA -并提供替代机制的细节。
CPA is a class of isothermal amplification reactions that is carried out by a strand displacement DNA polymerase and does not require an initial denaturation step or the addition of a nicking enzyme. At the assay temperature of 63°C, the formation of a primer-template hybrid at transient, spontaneous denaturation bubbles in the DNA template is favored over re-annealing of the template strands by the high concentration of primer relative to template DNA. Strand displacement is encouraged by the annealing of cross primers with 5′ ends that are not complementary to the template strand and the binding of a displacement primer upstream of the crossing primer. The resulting exponential amplification of target DNA is highly specific and highly sensitive, producing amplicons from as few as four bacterial cells. Here we report on the basic CPA mechanism – single crossing CPA – and provide details on alternative mechanisms.
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