A proteolytic method for evaluating O-GlcNAcylation on proteins of similar molecular weight to antibody heavy chain after immunoprecipitation.
A proteolytic method for evaluating O-GlcNAcylation on proteins of similar molecular weight to antibody heavy chain after immunoprecipitation.
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DOI：
10.1016/j.ab.2020.114001
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发表时间：
2020-12-15
影响因子：
2.9
通讯作者：
Slawson C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Machacek M;Fields PE;Slawson C
研究一种与抗体重链分子量相同的感兴趣的蛋白质是通过免疫沉淀法对其进行评估的一种常见的威慑。可以使用最小化免疫沉淀抗体的检测的方法。然而，这些仍然是评估细胞内蛋白是否被O-GlcNAc翻译后蛋白修饰的障碍，因为它干扰了抗体上的糖基化。IdeZ蛋白酶在铰链区特异性地切割抗体，使抗体片段在变性后崩解到25 kDa。因此，这种蛋白分解方法可以唯一地评估先前被抗体重链遮盖的感兴趣蛋白质的O-GlcN酰化。
Investigating a protein of interest that runs at the same molecular weight as antibody heavy chain is a frequent deterrent to its evaluation by immunoprecipitation. Methods of minimizing the detection of the immunoprecipitating antibody are available. However, these still present a barrier to evaluating if intracellular proteins are modified by the O-GlcNAc post-translation protein modification due to interfering glycosylation on antibodies. IdeZ protease specifically cleaves antibody at the hinge region, allowing collapse of the antibody fragments to 25 kDa after denaturation. Thus, this proteolytic method uniquely allows evaluation of O-GlcNAcylation of proteins of interest formerly obscured by antibody heavy chain.
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影响因子：
16.6
作者：
Zhang, Liyong;Chen, Xin;Sharma, Parveen;Moon, Mark;Sheftel, Alex D.;Dawood, Fayez;Nghiem, Mai P.;Wu, Jun;Li, Ren-Ke;Gramolini, Anthony O.;Sorensen, Poul H.;Penninger, Josef M.;Brumell, John H.;Liu, Peter P.
通讯作者：
Liu, Peter P.
影响因子：
2.1
作者：
Lannergard, Jonas;Guss, Bengt
通讯作者：
Guss, Bengt
影响因子：
5.2
作者：
Hart GW
通讯作者：
Hart GW
影响因子：
4.8
作者：
Zhang, Zhen;Costa, Flavia C.;Slawson, Chad
通讯作者：
Slawson, Chad
DOI：
10.1084/jem.20030896
发表时间：
2003-12-15
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Murphy CA;Langrish CL;Chen Y;Blumenschein W;McClanahan T;Kastelein RA;Sedgwick JD;Cua DJ
通讯作者：
Cua DJ