Composition of yeast snRNPs and snoRNPs in the absence of trimethylguanosine caps reveals nuclear cap binding protein as a gained U1 component implicated in the cold-sensitivity of tgs1Δ cells.
Composition of yeast snRNPs and snoRNPs in the absence of trimethylguanosine caps reveals nuclear cap binding protein as a gained U1 component implicated in the cold-sensitivity of tgs1Δ cells.
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DOI：
10.1093/nar/gkr279
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发表时间：
2011-08
影响因子：
14.9
通讯作者：
Shuman S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schwer B;Erdjument-Bromage H;Shuman S
负责前 mRNA 剪接和 rRNA 加工的小核和核仁 RNA 具有标志性的 5'-三甲基鸟苷 (TMG) 帽。尽管 Tgs1 甲基转移酶合成 TMG 的机制已被阐明，但我们对当 TMG 帽缺失时 RNP 生物发生、结构和功能是否或如何受到干扰知之甚少。在这里，我们分析了通过串联亲和纯化从 TGS1 和 tgs1Δ 酵母菌株中分离出的 RNP。总含 SmB 的 RNP 的蛋白质和 U-RNA 含量相似。更精细的分析揭示了核帽结合蛋白 (CBP) 亚基 Sto1 和 Cbc2 与来自 tgs1Δ 细胞的完整 Mud1 和 Nam8 含有 U1 snRNP 的化学计量关联。来自 tgs1Δ 细胞的含有 Lea1 的 U2 snRNP 中的 CBP 没有相对富集。此外，CBP 与 tgs1Δ 细胞中含有成熟 Nop58 的 C/D snoRNP 或含有成熟 Cbf5 和 Gar1 的 H/ACA snoRNP 无关。 C/D snoRNP 的蛋白质组成以及与小亚基 (SSU) 加工体的关联并未因 TMG 帽的缺失而受到严重影响，H/ACA snoRNP 的组成也没有受到严重影响。 tgs1Δ 酵母细胞的冷敏感 (cs) 生长缺陷可以通过突变 Cbc2 的帽结合口袋来抑制，这表明与 tgs1Δ 细胞中暴露的 U1 m7G 帽结合的异位 CBP（本身不缺乏 TMG 帽）是 cs 表型的基础。
Small nuclear and nucleolar RNAs that program pre-mRNA splicing and rRNA processing have a signature 5′-trimethylguanosine (TMG) cap. Whereas the mechanism of TMG synthesis by Tgs1 methyltransferase has been elucidated, we know little about whether or how RNP biogenesis, structure and function are perturbed when TMG caps are missing. Here, we analyzed RNPs isolated by tandem-affinity purification from TGS1 and tgs1Δ yeast strains. The protein and U-RNA contents of total SmB-containing RNPs were similar. Finer analysis revealed stoichiometric association of the nuclear cap-binding protein (CBP) subunits Sto1 and Cbc2 with otherwise intact Mud1- and Nam8-containing U1 snRNPs from tgs1Δ cells. CBP was not comparably enriched in Lea1-containing U2 snRNPs from tgs1Δ cells. Moreover, CBP was not associated with mature Nop58-containing C/D snoRNPs or mature Cbf5- and Gar1-containing H/ACA snoRNPs from tgs1Δ cells. The protein composition and association of C/D snoRNPs with the small subunit (SSU) processosome were not grossly affected by absence of TMG caps, nor was the composition of H/ACA snoRNPs. The cold-sensitive (cs) growth defect of tgs1Δ yeast cells could be suppressed by mutating the cap-binding pocket of Cbc2, suggesting that ectopic CBP binding to the exposed U1 m7G cap in tgs1Δ cells (not lack of TMG caps per se) underlies the cs phenotype.
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