Sensing caspase 3 activity with quantum dot-fluorescent protein assemblies.
Sensing caspase 3 activity with quantum dot-fluorescent protein assemblies.
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DOI：
10.1021/ja809721j
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发表时间：
2009-03-25
影响因子：
15
通讯作者：
Medintz IL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Boeneman K;Mei BC;Dennis AM;Bao G;Deschamps JR;Mattoussi H;Medintz IL
我们证明了使用的混合荧光蛋白半导体量子点（QD）传感器能够特异性地监测胱天蛋白酶3蛋白水解活性。mCherry单体红色荧光蛋白被工程化以表达N-末端半胱天冬酶3切割位点，使用金属亲和配位以比率自组装到QD表面。荧光蛋白与QD的接近性允许其充当有效的荧光共振能量转移受体。向QD-mCherry缀合物中添加半胱天冬酶3酶特异性切割工程化mCherry接头序列，改变与QD的能量转移并允许定量监测蛋白水解活性。这种传感方法的固有优点包括以荧光附加形式的蛋白酶底物的细菌表达，易于自组装成QD，以及重组修饰底物以靶向其他感兴趣的蛋白酶的能力。
We demonstrate the use of a hybrid fluorescent protein semiconductor quantum dot (QD) sensor capable of specifically monitoring caspase 3 proteolytic activity. mCherry monomeric red fluorescent protein engineered to express an N-terminal caspase 3 cleavage site was ratiometrically self-assembled to the surface of QDs using metal-affinity coordination. The proximity of the fluorescent protein to the QD allows it to function as an efficient fluorescent resonance energy transfer acceptor. Addition of caspase 3 enzyme to the QD-mCherry conjugates specifically cleaved the engineered mCherry linker sequence altering energy transfer with the QD and allowing quantitative monitoring of proteolytic activity. Inherent advantages of this sensing approach include bacterial expression of the protease substrate in a fluorescently-appended form, facile self-assembly to QDs, and the ability to recombinantly modify the substrate to target other proteases of interest.
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