A solid-phase assay for beta-1,4-galactosyltransferase activity in human serum using recombinant aequorin.
A solid-phase assay for beta-1,4-galactosyltransferase activity in human serum using recombinant aequorin.
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使用重组水母发光蛋白固相测定人血清中的 β-1,4-半乳糖基转移酶活性。
DOI：
10.1016/0003-2697(91)90166-q
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发表时间：
1991
影响因子：
2.9
通讯作者：
Cummings,RD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zatta,PF;Nyame,K;Cormier,MJ;Mattox,SA;Prieto,PA;Smith,DF;Cummings,RD
我们开发了一种灵敏、快速的血清酶UDPGal：β-d-GlcNAc β-1，4-半乳糖基转移酶（β 1，4-GT）固相测定法（EC 2.4.1.38），采用重组生物发光蛋白水母发光蛋白作为产物检测的酶标记。β 1，4-GT的底物是一种新糖蛋白，即含有共价连接的GlcNAc残基的牛血清白蛋白（GlcNAc-BSA），并通过吸附固定在微量滴定板的威尔斯孔中。将血清样品与饱和水平的UDPGal和Mn 2+一起沿着添加到每个孔中。新糖蛋白受体被血清β 1，4-GT半乳糖基化产生N-乙酰乳糖胺衍生物Galβ1，4GlcNAc-BSA。通过加入生物素化的植物凝集素蓖麻凝集素-I（其特异性结合N-乙酰乳糖胺），然后加入链霉亲和素和生物素化的水母发光蛋白，对形成的产物进行定量。水母发光蛋白对Ca 2+产生闪光反应，在光度计中可检测到10− 19摩尔。用此方法测定人血清中β 1，4-GT活性和半纯化β 1，4-GT活性，在较宽的范围内与时间和血清浓度呈线性关系。该反应依赖于UDPGal和Mn 2+，具有高重现性和低背景，并且可以在几小时内进行。采用水母发光蛋白的测定比采用辣根过氧化物酶作为酶标记的测定具有更宽的线性范围。这些结果表明，β 1，4-GT的测定可用于测定异质样品中的活性，并且还证明了重组蛋白水母发光蛋白用于固相测定方法的实用性。
We have developed a sensitive and rapid solid-phase assay for the serum enzyme UDPGal:β-d-GlcNAc β-1,4-galactosyltransferase (β1,4-GT) (EC 2.4.1.38) that employs the recombinant bioluminescent protein aequorin as the enzyme label for product detection. The substrate for β1,4-GT is a neoglycoprotein, bovine serum albumin containing covalently attached GlcNAc residues (GlcNAc-BSA), and it was immobilized by adsorption in microtiter plate wells. Serum samples were added to each well along with saturating levels of UDPGal and Mn2+. Galactosylation of the neoglycoprotein acceptor by the serum β1,4-GT produces the N-acetyllactosamine derivative Galβ1,4GlcNAc-BSA. The product formed is quantified by adding the biotinylated plant lectin Ricinus communis agglutinin-I, which binds specifically to N-acetyllactosamine, followed by the addition of streptavidin and the biotinylated aequorin. Aequorin produces a flash of light in response to Ca2+and is detectable to 10−19mol in a luminometer. Using this assay, the β1,4-GT activity in human serum and the activity of a semipurified β1,4-GT are linear with time and serum concentration over a wide range. The reaction is dependent on UDPGal and Mn2+, is highly reproducible with a low background, and can be performed in a few hours. Assays employing aequorin have a wider range of linearity than those employing horseradish peroxidase as an enzyme label. These results demonstrate that the assay for β1,4-GT is useful for determining activity in heterogeneous samples and also demonstrate the utility of the recombinant protein aequorin for solid-phase assay methods.
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半乳糖基-β 1,3-N-乙酰氨基葡萄糖的生物合成。
DOI：
--
发表时间：
1982
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Sheares,BT;Lau,JT;Carlson,DM
通讯作者：
Carlson,DM
一种与癌症相关的半乳糖基转移酶同工酶。
DOI：
10.1056/nejm197809282991306
发表时间：
1978
期刊：
The New England journal of medicine
影响因子：
--
作者：
D. Podolsky;M. Weiser;K. Isselbacher;A. M. Cohen
通讯作者：
A. M. Cohen
影响因子：
15.9
作者：
KIM, YS;PERDOMO, J;CURTIS, KJ
通讯作者：
CURTIS, KJ
先天性红细胞生成障碍性贫血 II 型变体中红细胞膜糖缀合物的糖基化缺陷：低水平膜结合形式半乳糖基转移酶的关联。
影响因子：
20.3
作者：
Fukuda,MN;Masri,KA;Dell,A;Thonar,EJ;Klier,G;Lowenthal,RM
通讯作者：
Lowenthal,RM
影响因子：
4.1
作者：
LAMMERS, G;JAMIESON, JC
通讯作者：
JAMIESON, JC