A Pseudomonas putida bioreporter for the detection of enzymes active on 2-alkyl-4(1H)-quinolone signalling molecules
A Pseudomonas putida bioreporter for the detection of enzymes active on 2-alkyl-4(1H)-quinolone signalling molecules
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用于检测 2-烷基-4(1H)-喹诺酮信号分子活性酶的恶臭假单胞菌生物报告仪
DOI：
10.1007/s00253-012-4236-4
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发表时间：
2013
影响因子：
5
通讯作者：
Fetzner S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Müller C;Fetzner S
群体感应信号分子2-庚基-3-羟基-4（1H）-喹诺酮（2-heptyl-3-hydroxy-4（1H）-quinolone，PQS）和2-庚基-4（1H）-quinolone（HHQ）在铜绿假单胞菌毒力基因表达调控中起重要作用。为了构建一个特异性和灵敏度检测这些化合物的生物报告基因，在恶臭假单胞菌KT 2440中构建了一个质粒，该质粒具有编码PQS和HHQ响应性转录调节因子PqsR的pqsR基因，以及与pqsR控制的pqsA启动子融合的lacZ基因。生物报告基因对HHQ和PQS的响应浓度范围分别为0.1-10和0.01-5 μM，HHQ的EC 50值为1.50 ± 0.25 μM，PQS的EC 50值为0.15 ± 0.02 μM。2，4-二羟基喹啉是一种代谢产物。铜绿假单胞菌，没有引起报告酶活性的增加。为了测试生物报告物是否可用于检测对AQ信号分子有活性的酶，在报告菌株中表达编码2-甲基-3-羟基-4（1H）-喹诺酮2，4-双加氧酶的hodC基因。这种双加氧酶催化PQS的裂解，尽管活性非常低。hodC基因的共表达显著淬灭了生物报告基因对PQS的反应，培养提取物的HPLC分析证实了培养过程中PQS水平降低。该生物报告基因可用于筛选AQ-converting酶，这将是干扰群体感应从而干扰稻瘟病菌毒力的有用工具。铜绿。
The quorum sensing signalling molecules 2-heptyl-3-hydroxy-4(1H)-quinolone, termed the “Pseudomonasquinolone signal” (PQS), and 2-heptyl-4(1H)-quinolone (HHQ) play an important role in the control of virulence gene expression inPseudomonas aeruginosa. To construct a bioreporter for the specific and sensitive detection of these compounds, a plasmid with thepqsRgene encoding the PQS- and HHQ-responsive transcriptional regulator PqsR, and with the PqsR-controlledpqsApromoter fused to thelacZgene, was established inPseudomonas putidaKT2440. The bioreporter responds to HHQ and PQS at concentrations in the range of 0.1–10 and 0.01–5 μM, respectively, with EC50values of 1.50 ± 0.25 μM for HHQ and 0.15 ± 0.02 μM for PQS. 2,4-Dihydroxyquinoline, a metabolite produced abundantly byP. aeruginosa, did not elicit an increase in reporter enzyme activity. To test whether the bioreporter can be used for the detection of enzymes active on AQ signalling molecules, thehodCgene coding for 2-methyl-3-hydroxy-4(1H)-quinolone 2,4-dioxygenase was expressed in the reporter strain. This dioxygenase catalyses the cleavage of PQS, albeit with very low activity. The response of the bioreporter to PQS was significantly quenched by co-expression of thehodCgene, and HPLC analysis of culture extracts verified that the PQS levels decreased during cultivation. The bioreporter can be applied to screen for AQ-converting enzymes, which will be useful tools to interfere with quorum sensing and thus virulence inP. aeruginosa.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(18)55737-9
发表时间：
1952-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
I. Wells
通讯作者：
I. Wells
影响因子：
2.9
作者：
Zor, T;Seliger, Z
通讯作者：
Seliger, Z
影响因子：
5.1
作者：
Nelson, KE;Weinel, C;Fraser, CM
通讯作者：
Fraser, CM
铜绿假单胞菌在微通道中的运动分析
影响因子：
2.7
作者：
Sung;Heon;Chang
通讯作者：
Chang
影响因子：
2.6
作者：
Fernandez-Pinar, Regina;Camara, Miguel;Espinosa-Urgel, Manuel
通讯作者：
Espinosa-Urgel, Manuel