Development of clickable active site-directed photoaffinity probes for γ-secretase.
Development of clickable active site-directed photoaffinity probes for γ-secretase.
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DOI：
10.1016/j.bmcl.2012.02.027
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发表时间：
2012-04-15
影响因子：
2.7
通讯作者：
Johnson, Douglas S.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Crump, Christina J.;Ende, Christopher W. Am;Ballard, T. Eric;Pozdnyakov, Nikolay;Pettersson, Martin;Chau, De-Ming;Bales, Kelly R.;Li, Yue-Ming;Johnson, Douglas S.
我们开发了用于 γ-分泌酶的可点击活性定点光亲和探针，其中包含光反应性二苯甲酮基团和炔烃手柄，用于随后点击化学介导的与叠氮化物连接的报告标签的缀合，以实现标记蛋白质的可视化（例如，TAMRA-叠氮化物）或富集（例如，生物素-叠氮化物）。具体来说，我们合成了 L646 (2) 和 L505 (3) 的可点击类似物，并验证了早老素 1 N 末端片段 (PS1-NTF)（γ-分泌酶复合物中的活性位点天冬氨酰蛋白酶成分）的特异性标记。此外，我们还能够通过蛋白质印迹分析来鉴定信号肽肽酶（SPP）。此外，我们通过 TAMRA-叠氮化物点击化学，然后进行凝胶内荧光检测，以公正的方式分析了光标记的蛋白质。这种方法扩展了 γ-分泌酶抑制剂 (GSI) 光亲和探针的实用性，因为可以使用单个可点击的光亲和探针将标记的蛋白质标记为任意数量的叠氮化物连接的报告基团，用于目标下拉和/或荧光成像应用。
We have developed clickable active site-directed photoaffinity probes for γ-secretase which incorporate a photoreactive benzophenone group and an alkyne handle for subsequent click chemistry mediated conjugation with azide-linked reporter tags for visualization (e.g., TAMRA-azide) or enrichment (e.g., biotin-azide) of labeled proteins. Specifically, we synthesized clickable analogs of L646 (2) and L505 (3) and validated specific labeling to presenilin 1 N-terminal fragment (PS1-NTF), the active site aspartyl protease component within the γ-secretase complex. Additionally we were able to also identify signal peptide peptidase (SPP) by Western blot analysis. Furthermore, we analyzed the photo-labeled proteins in an unbiased fashion by click chemistry with TAMRA-azide followed by in-gel fluorescence detection. This approach expands the utility of γ-secretase inhibitor (GSI) photoaffinity probes in that labeled proteins can be tagged with any number of azide-linked reporters groups using a single clickable photoaffinity probe for target pull down and/or fluorescent imaging applications.
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影响因子：
5.6
作者：
Osenkowski, Pamela;Li, Hua;Ye, Wenjuan;Li, Dongyang;Aeschbach, Lorene;Fraering, Patrick C.;Wolfe, Michael S.;Selkoe, Dennis J.;Li, Huilin
通讯作者：
Li, Huilin
影响因子：
2.1
作者：
Nadin, A;López, JMS;Thomas, SR
通讯作者：
Thomas, SR
影响因子：
4.9
作者：
Shi, Haibin;Cheng, Xiamin;Yao, Shao Q.
通讯作者：
Yao, Shao Q.
DOI：
10.1073/pnas.0408007101
发表时间：
2004-12-07
影响因子：
11.1
作者：
Tarassishin, L;Yin, YI;Li, YM
通讯作者：
Li, YM
影响因子：
3.2
作者：
Ballell, L;Alink, KJ;Pieters, RJ
通讯作者：
Pieters, RJ