Imaging plasma membrane proteins in large membrane patches of Xenopus oocytes.
Imaging plasma membrane proteins in large membrane patches of Xenopus oocytes.
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对非洲爪蟾卵母细胞大膜斑块中的质膜蛋白进行成像。
DOI：
10.1007/s004240000341
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发表时间：
2000
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Lotan,I
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Singer-Lahat,D;Dascal,N;Mittelman,L;Peleg,S;Lotan,I
我们描述了一种异种卵母细胞质膜贴片的制备，该贴片附着在盖玻片上，其细胞内面暴露于浴溶液中。荧光标记后，通过共聚焦显微镜观察附着在质膜上的蛋白质。由于在这些质膜制备物中检测到皮质微丝元素，我们将这些补丁称为质膜-皮质补丁。这些补丁的形成方式和细胞化学检测所需的低浓度蛋白质使膜皮质补丁类似于电生理膜补丁，因此允许离子通道的细胞化学研究与电生理实验相关。此外，所描述的贴片类似于用于通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行生物化学分析的手动分离的质膜。细胞化学分析的膜皮层补丁也使检测的二维模式的组织膜蛋白（成簇或非成簇形式）。此外，贴片制备使得能够对膜蛋白的相对定位进行细胞化学研究。该方法能够整合离子通道的电生理学、生物化学和细胞化学研究，对离子通道功能提供全面的视角。
We describe the preparation of aXenopusoocyte plasma membrane patch attached to a cover-slip with its intracellular face exposed to the bath solution. The proteins attached to the plasma membrane were visualized by confocal microscopy after fluorescence labelling. Since cortical microfilament elements were detected in these plasma membrane preparations we termed the patches plasma membrane-cortex patches. The way these patches are formed and the low concentration of proteins needed for cytochemical detection make the membrane-cortex patches similar to electrophysiological membrane patches and therefore allow the cytochemical study of ion channels to be correlated with electrophysiological experiments. Furthermore, the described patch is similar to manually isolated plasma membranes used for biochemical analysis by sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Cytochemical analysis of membrane-cortex patches also enables the detection of the two-dimensional pattern of organization of membrane proteins (clustered or non-clustered forms). In addition, patch preparations enable cytochemical study of the relative localization of membrane proteins. The methodology enables integration of electrophysiological, biochemical and cytochemical studies of ion channels, giving a comprehensive perspective on ion channel function.
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