The N1 domain of human lactoferrin is required for internalization by caco-2 cells and targeting to the nucleus.
The N1 domain of human lactoferrin is required for internalization by caco-2 cells and targeting to the nucleus.
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人乳铁蛋白的 N1 结构域是 caco-2 细胞内化并靶向细胞核所必需的。
DOI：
10.1021/bi8012164
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发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Lönnerdal,Bo
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Suzuki,YasushiA;Wong,Henry;Ashida,Kin-Ya;Schryvers,AnthonyB;Lönnerdal,Bo
人乳铁蛋白 (hLf) 已被证明与 Caco-2 人小肠细胞系的细胞相互作用。目前关于其相互作用的分子细节的信息很少。作为详细表征这种相互作用的第一步，我们使用了一系列 Lf 嵌合体来分析 Lf 的哪一部分负责与 Caco-2 细胞的相互作用。由 hLf 和牛转铁蛋白 (bTf) 片段组成的重组嵌合蛋白是在杆状病毒-昆虫细胞系统中产生的，并通过阳离子交换层析和固定化 bTf 抗体亲和层析相结合进行纯化。每个嵌合体都用绿色荧光染料标记，以监测其与 Caco-2 细胞的相互作用。同样，用抗 LfR 抗体探测肠道 Lf 受体 (LfR)（也称为 intelectin），并用与红色荧光染料缀合的二抗进行检测。结果表明，含有 Lf N 叶或 N1.1 亚结构域的嵌合蛋白与完整的 Lf 结合到 Caco-2 细胞上。共聚焦显微镜分析表明，这些蛋白质与 LfR 一起被内化并靶向细胞核。这些结果表明 hLf 的 N1.1 子结构域足以结合、内化和靶向 Caco-2 细胞的细胞核。
Human lactoferrin (hLf) has been shown to interact with cells from the Caco-2 human small intestinal cell line. There currently is little information about the molecular details of its interaction. As a first step toward detailed characterization of this interaction, we used a series of Lf chimeras to analyze which part of Lf is responsible for the interaction with Caco-2 cells. Recombinant chimeric proteins consisting of segments of hLf and bovine transferrin (bTf) were produced in a baculovirus−insect cell system and purified by a combination of cation exchange chromatography and immobilized bTf antibody affinity chromatography. Each chimera was labeled with a green fluorescent dye to monitor its interaction with Caco-2 cells. Similarly, the intestinal Lf receptor (LfR), also known as intelectin, was probed with an anti-LfR antibody that was detected with a secondary antibody conjugated with a red-color fluorescent dye. The results demonstrated that chimeric proteins containing the N-lobe or the N1.1 subdomain of Lf bound as well as intact Lf to Caco-2 cells. Confocal microscopy analysis revealed that these proteins, along with the LfR, were internalized and targeted to the nucleus. These results indicate that the N1.1 subdomain of hLf is sufficient for binding, internalization, and targeting to the nucleus of Caco-2 cells.
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