Generation and Assembly of Virus-Specific Nucleocapsids of the Respiratory Syncytial Virus.
Generation and Assembly of Virus-Specific Nucleocapsids of the Respiratory Syncytial Virus.
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DOI：
10.3791/62010
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发表时间：
2021-07-27
影响因子：
1.2
通讯作者：
Liang, Bo
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gao, Yunrong;Ogilvie, Claire;Raghavan, Anirudh;Von Hoffmann, Chloe;Liang, Bo
使用真实的RNA模板对于推进病毒RNA合成的基础知识至关重要，这些基础知识可以指导病毒学中的机制发现和检测开发。非节段负义（NNS）RNA病毒（如呼吸道合胞病毒（RSV））的RNA模板不是单独的RNA分子，而是核蛋白（N）标记的核糖核蛋白复合物。尽管真实的RNA模板的重要性，这样的核糖核蛋白复合物的产生和组装仍然是复杂的，需要深入阐明。主要的挑战是过表达的RSV N与细胞RNA非特异性结合，形成随机的核衣壳样颗粒（NCLP）。在此，我们建立了一个方案，以获得无RNA的N（N0），首先通过共表达N与伴侣磷蛋白（P），然后组装N0与RNA寡核苷酸与RSV特异性RNA序列，以获得病毒特异性核衣壳（NC）。该协议显示了如何克服困难，在传统上具有挑战性的病毒核糖核蛋白复合物的制备。
The use of an authentic RNA template is critical to advance the fundamental knowledge of viral RNA synthesis that can guide both mechanistic discovery and assay development in virology. The RNA template of nonsegmented negative-sense (NNS) RNA viruses, such as the respiratory syncytial virus (RSV), is not an RNA molecule alone but rather a nucleoprotein (N) encapsidated ribonucleoprotein complex. Despite the importance of the authentic RNA template, the generation and assembly of such a ribonucleoprotein complex remain sophisticated and require in-depth elucidation. The main challenge is that the overexpressed RSV N binds non-specifically to cellular RNAs to form random nucleocapsid-like particles (NCLPs). Here, we established a protocol to obtain RNA-free N (N0) first by co-expressing N with a chaperone phosphoprotein (P), then assembling N0 with RNA oligos with the RSV-specific RNA sequence to obtain virus-specific nucleocapsids (NCs). This protocol shows how to overcome the difficulty in the preparation of this traditionally challenging viral ribonucleoprotein complex.
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